[发明专利]用于蛋白质聚乙二醇化的添加剂体系

权利要求书

1.用于蛋白质聚乙二醇化反应的改进添加剂体系，所述体系包含单独的对氨基苯甲酰肼或对氨基苯甲酰肼与芳族胺或铵盐的组合。

2.如权利要求1所述的体系，其中所述芳族胺选自3,5-二氨基苯甲酸、邻苯二胺、1-吡啶-2-基-乙胺、2-(二甲基氨基)乙肼、间苯二胺和2-氨甲基吡啶。

3.如权利要求1所述的体系，其中所述铵盐选自乙酸铵和氯化铵。

4.如权利要求1所述的体系，其中优选体系组合包含对氨基苯甲酰肼与3,5-二氨基苯甲酸或对氨基苯甲酰肼与氯化铵。

5.如权利要求1所述的体系，其中所述反应是含有对乙酰基苯丙氨酸残基的蛋白质和氨氧基-PEG化合物之间的缀合反应。

6.如权利要求1所述的体系，其中所述添加剂体系增加缀合反应速率，提供高缀合产物产率并促进完成缀合反应所需的氨氧基-PEG当量的减少。

7.用于获得聚乙二醇化蛋白质的方法，所述方法包括下列步骤：

(a)鉴定蛋白质、PEG试剂和添加剂体系；和

(b)溶解蛋白质，然后在添加剂体系存在下将所述蛋白质与PEG试剂混合，从而以高产率获得聚乙二醇化蛋白质。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述蛋白质是含有对乙酰基苯丙氨酸残基的松弛素或FGF21。

9.如权利要求7所述的方法，其中将所述与PEG试剂混合的溶解蛋白质溶液保持在约4的pH。

10.如权利要求7所述的方法，其中将反应混合物保持在为约20℃至约25℃的温度范围。

11.如权利要求7所述的方法，其中所述添加剂体系包含单独的对氨基苯甲酰肼或对氨基苯甲酰肼与芳族胺如3,5-二氨基苯甲酸或铵盐如乙酸铵或氯化铵的组合。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述高质量对氨基苯甲酰肼与氯化铵的添加剂组合优选用于大规模生产聚乙二醇化蛋白质。

13.如权利要求6所述的方法，其中所述PEG试剂选自PEG-OA和其他具有氨氧基的PEG衍生物。

14.包含通过权利要求7-13的方法获得的聚乙二醇化蛋白质的药物组合物，其用于需要其的个体的治疗。