[发明专利]一种基于EMS诱变的蒲公英耐盐突变体筛选的方法

说明书

本发明公开了一种基于EMS诱变的蒲公英耐盐突变体筛选的方法，包括以下步骤：步骤S1：清洗蒲公英，以蒲公英叶片为试材，将蒲公英叶片进行清洗，最后用手术刀将蒲公英叶片切成1cm x1cm左右见方的小块；步骤S2：愈伤组织处理，将步骤S1中的愈伤组织试材浸泡在0.15%EMS处理液中；步骤S3：当步骤S2中的愈伤组织处理完毕后，促进其生长；步骤S4：将步骤S3中将恢复生长后的愈伤组织进行Nacl逐步筛选；步骤S5：将步骤4中的愈伤组织在最大耐受体积浓度1.2%的Nacl的培养基中培养筛选10‑15d。本发明中育种效率提高，明确了耐盐蒲公英诱变的最佳诱变条件，1.2%Nacl选择压条件下，蒲公英愈伤组织的成活率较对照提高46.5%。

技术领域

本发明涉及中药材诱变育种技术领域，更具体地说，本发明涉及一种基于EMS诱变的蒲公英耐盐突变体筛选的方法。

背景技术

中药材的战略地位逐步凸显。蒲公英素有“天然抗生素”和“草药皇后”之称,是传统药食同源的多年生中药材，全草可入药，种植面积逐年扩大，相关产业稳步发展。但蒲公英的育种技术匮乏，抗逆性优良品种短缺，严重影响了蒲公英产业的发展。

 EMS诱变是现代分子育种及资源创新的有效手段之一，具有诱变效率高、突变多等优势，尤其与组织培养技术相结合，可提高细胞有益突变率。多年来EMS诱变育种在林木、花卉和农作物研究中取得了一定的成果。

以火龙果成熟枝条上诱导的无菌幼苗为试材，通过EMS诱变处理，对成活的幼苗施加 HYP选择压，获得了火龙果无菌幼苗，且具有良好的抗寒能力 (邓仁菊等，2016)；

在罗布麻的EMS突变体库中观察到了叶色、叶型、苗期分枝等突变类型(任婷婷等，2020)；

EMS诱变白桦种子，统计观测到目标性状发生了突变，解决了白桦自发基因突变频率低、传统育种的周期很长的问题(高彩球等，2022)；

用不同浓度的EMS溶液浸泡苦瓜种子，选出了适宜嗑口苦瓜诱变的最佳诱变条件，既保证出苗率，且诱变率高，获得了大量可稳定遗传的突变体，可用于快速创制苦瓜突变体、重要性状的解析及新品种的选育(高彩球等，2022)；

基于组培再生EMS诱变获得不同巨菌草突变体，选定产量最高的品种为耐盐碱的巨菌草种质资源(陈红等，2022)。

上述诱变方法在提高植物突变率和抗逆性方面取得了重要成果，但是EMS诱变育种在耐盐蒲公英选育方面未见报道。

蒲公英传统育种困难，新型育种技术匮乏，抗逆性优良品种短缺，严重影响了蒲公英产业的发展。

现有技术以系统选育为主，自然突变率低，针对性差，耐盐性不突出。

因此我们提出了一种基于EMS诱变的蒲公英耐盐突变体筛选的方法来解决上述问题。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的实施例提供一种基于EMS诱变的蒲公英耐盐突变体筛选的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于EMS诱变的蒲公英耐盐突变体筛选的方法，包括以下步骤：

步骤S1：清洗蒲公英，以蒲公英叶片为试材，将蒲公英叶片进行清洗，最后用手术刀将蒲公英叶片切成1cm x1cm左右见方的小块；

将蒲公英叶片放在含不同浓度的植物生长调节剂MS培养基中诱导愈伤组织，试验均为（25 ± 1）℃暗培养30d；

步骤S2：愈伤组织处理，将步骤S1中的愈伤组织试材浸泡在0.15%EMS处理液中；

步骤S3：当步骤S2中的愈伤组织处理完毕后，将愈伤组织接种于继代培养基上恢复生长15～20d，促进其生长；

步骤S4：将步骤S3中将恢复生长后的愈伤组织进行Nacl逐步筛选，3次重复；

步骤S5：将步骤4中的愈伤组织在最大耐受体积浓度1.2%的Nacl的培养基中培养筛选10-15d。