[发明专利]一种柑橘原生质体裂解液及其应用、柑橘果肉液泡的提取方法

权利要求书

1.一种柑橘原生质体裂解液，其特征在于，包括以下含量的组分：0.2～0.8M甘露醇，10wt.％Ficoll，10～20mMEDTA，1～5mMDTT和10～20mMpH缓冲液；

所述柑橘原生质体裂解液的pH为7.8～8.5。

2.根据权利要求1所述的柑橘原生质体裂解液，其特征在于，所述pH缓冲液包括磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。

3.权利要求1或2所述的柑橘原生质体裂解液在柑橘液泡提取中的应用。

4.一种柑橘液泡的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

将权利要求1或2所述的柑橘原生质体裂解液预热至37～42℃，得到预热裂解液；

将柑橘原生质体与所述预热裂解液按照1g：(2～3)mL的质量体积比混合，裂解后静置，得到粗提液；所述粗提液中含有所述柑橘液泡。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述裂解的时间为2～4min。

6.根据权利要求4或5所述的提取方法，其特征在于，所述裂解的方式包括搅拌或吸打。

7.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述静置的时间为6～10min。

8.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，还包括对所述粗提液进行纯化；所述纯化包括如下步骤：

依次向所述粗提液中加入Ficoll质量体积百分含量为8％的Ficoll溶液和液泡溶液，4℃，50～3000g离心2～20min，得离心液；

所述离心液出现分层，由上到下依次为第一层、第二层和第三层，收集第二层，得到所述柑橘液泡；

所述液泡溶液的pH为7.5～8.0，包括0.4～0.8Mmannitol和10～20mMpH缓冲液；

所述Ficoll质量体积百分含量为8％的Ficoll溶液由所述液泡溶液和权利要求1或2所述的柑橘原生质体裂解液配制而成；所述柑橘原生质体裂解液和液泡溶液的体积比为4：1。

9.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，所述粗提液、Ficoll质量体积百分含量为8％的Ficoll溶液和液泡溶液的体积比为(5～6)：(3～4)：1。

10.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，所述pH缓冲液包括磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。