[发明专利]一种合成使赤拟谷盗对磷化氢敏感的dsRNA的引物对及合成方法和应用在审
| 申请号： | 202211682093.1 | 申请日： | 2022-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN115786348A | 公开（公告）日： | 2023-03-14 |
| 发明（设计）人： | 唐培安;吴学友;王康旭;孙晟源 | 申请（专利权）人： | 南京财经大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/686;C12N15/89;A01K67/033 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 戴嵩玮 |
| 地址： | 210023 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 合成 使赤拟谷盗 磷化氢 敏感 dsrna 引物 方法 应用 | ||
1.一种合成使赤拟谷盗对磷化氢敏感的dsRNA的引物对，其特征在于，所述引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种合成使赤拟谷盗对磷化氢敏感的dsRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：将赤拟谷盗的总RNA反转录为cDNA，以所述cDNA为模板，利用权利要求1所述引物对进行PCR扩增，将PCR扩增产物合成为所述dsRNA。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系以25μL计，包括：模板1μL、上游引物和下游引物各0.5μL、TaKaRa TaqTMPCR Master Mix 12.5μL和余量的无RNA酶水。
4.根据权利要求2或3所述方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序，包括：94℃预变性5min；94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸2min，40循环；72℃再延伸10min。
5.利用权利要求2～4任一项所述方法合成的使赤拟谷盗对磷化氢敏感的dsRNA。
6.权利要求1所述引物对或权利要求5所述dsRNA在构建赤拟谷盗磷化氢敏感种群中的应用。
7.一种构建赤拟谷盗磷化氢敏感种群的方法，其特征在于，包括以下步骤：向赤拟谷盗的蛹中显微注射权利要求5所述dsRNA。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，将dsRNA显微注射至腹部第三和第四节腹节之间。
9.根据权利要求7或8所述方法，其特征在于，所述dsRNA的注射剂量为50～1000ng/只昆虫。
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