[发明专利]一种与鹅精子活力相关的miRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种与鹅精子活力相关的miRNA及应用，通过对高、低精子活力鹅的睾丸组织进行转录组测序，鉴定到了1个影响鹅精子活力的miRNA，开发出可用于评估鹅精子活力的分子标记，对高精子活力公鹅的精确选留、早期选育、遗传改良及分子评价指标等具有重要意义和实用价值。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种与鹅精子活力相关的miRNA及其应用。

背景技术

繁殖性状是家禽生产中最重要的经济性状，提高繁殖性能始终是家禽遗传改良的重要目标。公禽精液品质是影响种蛋受精率的重要因素。精液品质中的精子活力是精子运动和代谢能力的反映，该性状是保证精子与卵子相遇并完成受精的前提。研究表明，精子活力性状与受精率呈高度的正相关。而且精子活力性状较其他精液品质性状的评估相对简单，且易于推广。因此，精子活力是最适合衡量种家禽繁殖性能的指标。弗罗曼等研究发现，精子活力是决定动物繁殖力最重要的一个指标。该研究认为，精子活力反应了精子细胞中ATP的含量，没有足够的能量，精子难以到达雌性生殖道与卵子结合。鲍勒等研究认为“精子活力可以作为精液品质重要的生物预言器”，精子活力高的种公鸡，其受精率增加了约50％。孙妍妍等研究表明，精子活力高的公鸡的精液量和精子活力极显著高于精子活力低的公鸡(P＜0.01)。与低精子活力公鸡的睾丸相比，高精子活力公鸡睾丸生精小管多而排列紧密，充满成熟精子。胡娟等发现，实际生产中的调查数据发现精子活力低下是低繁殖力公鸡的主要表现，80％的低受精率种公鸡表现出低精子活力，制约了地方鸡品种的生产发展。因此，提高整体精液品质水平，尤其是提高精子活力水平，是提高种公禽繁殖性状的有效途径。

繁殖性状是家禽生产中最重要的经济性状，提高繁殖性能始终是家禽遗传改良的重要目标。精子的正常生成和精子活力受到动物体内多种因素的调节，如激素、生长因子和酶等，是复杂基因调控网络共同作用的结果。精子活力低下己成为制约种禽生产效率、影响家禽养殖效益的重要因素。研究精子活力的分子调控机理对提升精液品质和种公禽的选育有重要意义。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种与鹅精子活力相关的miRNA及其应用。本发明通过对高、低精子活力公鹅的睾丸组织进行转录组测序，鉴定到了1个影响鹅精子活力的miRNA，开发出可用于评估鹅精子活力的分子标记，对高精子活力公鹅的精确选留、早期选育、遗传改良及分子评价指标等具有重要意义和实用价值。

本发明所采用的技术方案为：

一种与鹅精子活力相关的miRNA，所述miRNA的靶基因是NKAIN3。

所述miRNA为gga-miR-140-3p，其核苷酸序列为CCACAGGGUAGAACCACGGAC，如如SEQID NO.1所示。

所述的miRNA作为分子标记在鹅精子活力评估中的应用。

一种评估鹅精子活力高低的检测方法，包括如下步骤：

(1)精液样品的采集与储存；

(2)RNA提取、文库构建和转录组测序；

(3)miRNA及mRNA差异表达分析；

(4)miRNA和mRNA联合分析筛选关键miRNA；

(5)荧光定量PCR验证。

步骤(1)中，综合精子活力及种蛋受精率数据，经统计学检验，筛选出高精子活力公鹅组和低精子活力公鹅组，屠宰取公鹅同侧睾丸组织置于液氮保存，随后转入-80℃超低温冰箱保存。

步骤(2)中，利用RNA提取试剂盒提取睾丸组织总RNA，构建用于转录组测序的文库，之后进行转录组的测序。