[发明专利]一种用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：包括质粒和阳离子脂质辅助纳米颗粒，所述质粒为增强T细胞免疫相效应相关基因表达质粒，所述阳离子脂质辅助纳米颗粒为阳离子脂质辅助的聚合物纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：所述质粒为基因激活工具CRISPRa质粒和基因过表达质粒中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：质粒启动子为强启动子或肿瘤特异性启动子其中至少一种。

4.根据权利要求3所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：所述强启动子为巨细胞病毒启动子、鸡β-肌动蛋白启动子、延伸因子-1α启动子中的一种；肿瘤特异性启动子为酪氨酸酶启动子、生存素启动子中的至少一种。

5.根据权利要求2所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：所述基因激活工具CRISPRa质粒为靶向激活趋化因子配体9的CRISPRa质粒、靶向激活趋化因子配体10的CRISPRa质粒、靶向激活趋化因子配体11的CRISPRa质粒中的至少一种；所述基因过表达质粒为趋化因子配体9、抗细胞程序性死亡-配体1单链可变区片段表达质粒中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：所述质粒为人源、鼠源基因的至少一种。

7.根据权利要求5所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：所述基因激活工具CRISPRa质粒包括两个质粒，其中一个质粒包括靶向趋化因子配体9，趋化因子配体10，趋化因子配体11的具有噬菌体MS2外壳蛋白二聚体的发卡结构的引导RNA以及失活核酸内切酶dCas9与转录激活因子VP64融合表达质粒，另一个质粒包括转录辅助激活蛋白噬菌体MS2外壳蛋白、NF-κB转录因子p65蛋白及热休克调节蛋白HSF1蛋白融合表达质粒；基因过表达质粒序列为趋化因子配体9与抗细胞程序性死亡-配体1单链可变区片段通过P2A切割肽连接而成的一个共表达质粒。

8.根据权利要求2所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：所述质粒的终止子为bGH polyA。

9.根据权利要求1所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：所述阳离子脂质辅助纳米颗粒中的脂质为阳离子胆固醇衍生物、烷基链阳离子脂质中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：所述阳离子胆固醇衍生物为N，N-双(2-羟乙基)-N-甲基-N-(2-胆固醇氧羰基氨基乙基)溴化铵、实验室合成阳离子胆固醇衍生物CL3、实验室合成阳离子胆固醇衍生物CL7中的至少一种，所述烷基链阳离子脂质为溴化三甲基-2,3-二油酰氧基丙基铵、实验室合成烷基链阳离子脂质AL6、实验室合成烷基链阳离子脂质AL7中的至少一种。

11.根据权利要求1所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：阳离子脂质辅助的聚合物纳米颗粒中的聚合物为聚乙二醇修饰的聚(乙交酯-co-丙交酯)以及聚(乙交酯-co-丙交酯)中的至少一种。

12.根据权利要求11所述的用于增强T细胞抗肿瘤免疫效应的基因纳米药物，其特征在于：阳离子脂质辅助的聚合物纳米颗粒中的聚合物为聚乙二醇修饰的聚(乙交酯-co-丙交酯)以及聚(乙交酯-co-丙交酯)，聚乙二醇修饰的聚(乙交酯-co-丙交酯)占全部聚合物比例范围为60％-100％。