[发明专利]一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法

权利要求书

1.一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1，分别配置亚甲基蓝染液、尼罗红染液，得到亚甲基蓝工作液、尼罗红染料工作液；

步骤S2，获取包含微塑料的污染物样品，并对污染物样品进行预处理，用以去除微生物质，得到去除微生物质的污染物样品；

步骤S3，在所述亚甲基蓝工作液中加入去除微生物质的污染物样品，震荡反应，得到第一反应液；

步骤S4，在第一反应液中加入所述尼罗红染料工作液，水浴加热反应，得到第二反应液；

步骤S5，将第二反应液冷却至室温，真空过滤，保留染色后的微塑料，利用荧光显微镜于520～530nm波长下观察荧光物质，进行计数、测量尺寸，确定污染物样品中微塑料的含量。

2.根据权利要求1所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S1中将亚甲基蓝试剂加入水溶液中，配置成浓度为0.1%～1%浓度的亚甲基蓝工作液；将生物染色剂尼罗红加入丙酮中溶解，再使用正己烷溶液稀释配置成浓度为1～20μg/mL的尼罗红染料工作液。

3.根据权利要求2所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S1中将亚甲基蓝试剂加入水溶液中，配置成浓度为0.6%～1%浓度的亚甲基蓝工作液；将生物染色剂尼罗红加入丙酮中溶解，再使用正己烷溶液稀释配置成浓度为10～20μg/mL的尼罗红染料工作液。

4.根据权利要求1所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S2中包含微塑料的污染物样品选自水样品、空气样品或固体样品；待测样的重量为1μg～1kg。

5.根据权利要求4所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S2中的固体样品选自土壤、食品、食品的中间产品、堆肥、污泥、沉积物、生物样品或动物粪便。

6.根据权利要求4所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S2中生物样品选自动物或植物、动物的器官、植物的组织或动物胃内容物样品。

7.根据权利要求1所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S3中在所述亚甲基蓝工作液中加入去除微生物质的污染物样品，在室温下震荡反应5～10min，得到第一反应液；所述去除微生物质的污染物样品与所述亚甲基蓝工作液的体积比为100:2～100:10。

8.根据权利要求1所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S4中在第一反应液中加入所述尼罗红染料工作液，于35～70℃水浴加热反应10～15min，得到第二反应液；所述去除微生物质的污染物样品与所述尼罗红染料工作液的体积比为100:2～100:10。

9.根据权利要求1所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S5中将第二反应液冷却至室温，使用Whanman滤膜进行真空过滤，保留染色后的微塑料，过滤后的有机膜放置于干净培养皿内，利用荧光显微镜于520～530nm波长下观察荧光物质，进行计数、测量尺寸，确定污染物样品中微塑料的含量。

10.根据权利要求9所述的一种基于尼罗红染色剂的微塑料荧光染色定量检测方法，其特征在于，所述步骤S5中所述Whanman滤膜的孔径为1.2μm。