[发明专利]一种降低辣椒花药培养污染率的方法

说明书

本发明提供了一种降低辣椒花药培养污染率的方法，花蕾采集后，先对花蕾进行消毒，消毒方式为：流水冲洗后，在超净工作台中用75％酒精消毒30～35s，再用0.1％升汞、4％～8％次氯酸钠或50％84消毒液杀菌5～15min，最后用无菌水冲洗；同时，花药接种步骤中，于花药诱导培养基中添加0.01～0.03mg/L氨苄和1～5mg/L槲皮素。本发明通过对辣椒花蕾不同消毒方式及消毒时间的试验，筛选出最适消毒试剂种类、浓度及消毒时间，通过对诱导培养基中添加不同外源物试验，筛选出最佳外源物质组合及浓度，降低花药培养过程中因微生物的侵染所导致的污染率。

技术领域

本发明涉及组织培养领域，尤其涉及一种降低辣椒花药培养污染率的方法。

背景技术

辣椒(Capsicum annuum L)因其营养价值较高，且烹饪方式多种多样，在我国广泛种植，是一种重要的蔬菜作物。辣椒的营养价值极高，果皮中含有丰富的蛋白质、维生素C、胡萝卜素以及钙、铁维等物质，深受人们喜爱。

辣椒属异花授粉作物，天然杂交率高，通过自交分离选育纯系时间长，而且基因之间存在显隐性关系，因此很难选育出综合性状优良、具有突出优点且配合力强、适宜作为强优势亲本的品系。

花药培养属于种质资源创制的重要辅助育种技术，不仅能缩短常规杂交育种所需的年限，提高选种效率，还能充分表现各种配子组合的基因型类型，在育种和机理研究中均具有很大潜力。

尽管花药培养在辣椒上开始较早，但其技术还不够成熟和完善。目前，关于辣椒花药培养，大多是采用脱分化、再分化等愈伤组织诱导途径；也有少量胚状体诱导途径。然而，无论是哪儿种方式，在花药培养过程中，由于花药本身携带的真菌、细菌以及在接种过程中一些微生物的侵染等，都容易在培养瓶中滋生大量的菌斑，使培养材料因遭到污染而不能正常生长发育。

为此，急需一种降低辣椒花药培养污染率的方法，以提高辣椒花药培养成功率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种降低辣椒花药培养污染率的方法。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

一种降低辣椒花药培养污染率的方法，花蕾采集后，先对花蕾进行消毒，消毒方式为：流水冲洗后，在超净工作台中用75％酒精消毒30～35s，再用0.1％升汞、4％～8％次氯酸钠或50％84消毒液杀菌5～15min，最后用无菌水冲洗；同时，在花药接种步骤中，于花药诱导培养基中添加0.01～0.03mg/L氨苄和1～5mg/L槲皮素。

作为本发明的优选方式之一，包括如下具体步骤：

(1)采集花蕾

选择目标辣椒植株，并摘取处于单核靠边期的花蕾；采摘后，向花蕾表面喷无菌水，并装入塑封袋中置于4℃环境中处理2～5d；

(2)花蕾消毒

取出花蕾，经流水冲洗后，置于超净工作台中用75％酒精消毒30～35s，再用0.1％升汞、4％～8％次氯酸钠或50％84消毒液杀菌5～15min，最后用无菌水冲洗；

(3)剥蕾

在超净工作台上，将消毒后的花蕾置于无菌滤纸上，待吸干表面水分后剥开花蕾，取出花药；

(4)接种

将取出的花药接种于诱导培养基；所述诱导培养基的配方为：MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.01～0.03mg/L氨苄+1～5mg/L槲皮素；

(5)培养

接种后放入32～35℃的恒温培养箱中暗培养2～5d后，置于温度25℃、光照强度2500lx、光照时间16h/d的培养室进行40～60d培养。