[发明专利]一种降低辣椒花药培养污染率的方法

权利要求书

1.一种降低辣椒花药培养污染率的方法，其特征在于，花蕾采集后，先对花蕾进行消毒，消毒方式为：流水冲洗后，在超净工作台中用75％酒精消毒30～35s，再用0.1％升汞、4％～8％次氯酸钠或50％84消毒液杀菌5～15min，最后用无菌水冲洗；同时，在花药接种步骤中，于花药诱导培养基中添加0.01～0.03mg/L氨苄和1～5mg/L槲皮素。

2.根据权利要求1所述的降低辣椒花药培养污染率的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：

(1)采集花蕾

选择目标辣椒植株，并摘取处于单核靠边期的花蕾；采摘后，向花蕾表面喷无菌水，并装入塑封袋中置于4℃环境中处理2～5d；

(2)花蕾消毒

取出花蕾，经流水冲洗后，置于超净工作台中用75％酒精消毒30～35s，再用0.1％升汞、4％～8％次氯酸钠或50％84消毒液杀菌5～15min，最后用无菌水冲洗；

(3)剥蕾

在超净工作台上，将消毒后的花蕾置于无菌滤纸上，待吸干表面水分后剥开花蕾，取出花药；

(4)接种

将取出的花药接种于诱导培养基；所述诱导培养基的配方为：MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.01～0.03mg/L氨苄+1～5mg/L槲皮素；

(5)培养

接种后放入32～35℃的恒温培养箱中暗培养2～5d后，置于温度25℃、光照强度2500lx、光照时间16h/d的培养室进行40～60d培养。

3.根据权利要求2所述的降低辣椒花药培养污染率的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，选择天气晴朗、且气温20～30℃的上午8：00以前或下午5：00以后，从田间摘取目标辣椒植株的花蕾；花蕾选取时，选择初花期，且花蕾的形态以“花瓣与花萼等长”或“花瓣露出花萼不超过2mm”为标准。

4.根据权利要求2所述的降低辣椒花药培养污染率的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，目标辣椒植株具体为生长健壮、无病虫害的辣椒植株。

5.根据权利要求2所述的降低辣椒花药培养污染率的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，应用DAPI染色法及结合镜检鉴定辣椒小孢子的具体发育时期，从中筛选出处于单核靠边期的花蕾。

6.根据权利要求2所述的降低辣椒花药培养污染率的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将花蕾进行消毒，流水冲洗20min后，在超净工作台中用75％酒精消毒30～35s，再用0.1％升汞、4％～8％次氯酸钠或50％84消毒液杀菌5～15min，最后用无菌水冲洗三次，每次5min。

7.根据权利要求2所述的降低辣椒花药培养污染率的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，采用红外线灭菌仪灭菌镊子和解剖刀后，利用镊子和解剖刀剥开花蕾，取出花药；过程中，注意避免损伤、损坏花药，并把花丝去除干净。

8.根据权利要求2所述的降低辣椒花药培养污染率的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，将取出的花药接种于装有诱导培养基的三角瓶中，每瓶接种5～6个花粉粒，将三角瓶封口。