[发明专利]一种融合基因、表达载体及抗糖尿病药物筛选方法

权利要求书

1.一种融合基因，其特征在于，所述融合基因是蓝色荧光蛋白基因EBFP2、自裂肽基因T2A和人源钠-葡萄糖转运蛋白基因SGLT2的融合；

所述融合基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述融合基因，其特征在于，所述融合基因的制备方法为：先将蓝色荧光蛋白基因EBFP2与自裂肽基因T2A通过PCR方法拼接成融合基因EBFP2-T2A，然后再将以上融合基因EBFP2-T2A通过PCR方法与人源基因SGLT2拼接起来，最终得到完整融合基因EBFP2-T2A-SGLT2，即融合基因。

3.一种基于权利要求1-2任一项所述融合基因的表达体系，其特征在于，该表达体系包含所述融合基因插入过表达载体pCDNA3.1获得融合基因过表达载体pBTS，或融合基因亚克隆至慢病毒载体获得融合基因过表达慢病毒颗粒Levi_BTS，或融合基因亚克隆至腺病毒载体获得融合基因过表达腺病毒颗粒Ad_BTS；然后通过转染或感染细胞获得过表达融合蛋白细胞株。

4.根据权利要求3所述的一种融合基因表达体系，其特征在于，该表达体系还包含基于融合基因而构建的腺相关病毒AAV_BTS，腺相关病毒AAV_BTS用于后续小鼠动物实验。

5.根据权利要求3所述的一种融合基因表达体系，其特征在于，该表达体系以蓝色荧光蛋白EBFP2作为报告基因，同时其荧光值亦可作为后续评价SGLT2活性的内参。

6.基于权利要求2所述融合基因的抗糖尿病药物筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）基于融合基因EBFP2-T2A-SGLT2构建融合基因过表达载体pBTS；

（2）将融合基因过表达载体pBTS转染细胞建立融合基因过表达细胞模型；

（3）该细胞模型采用EBFP2作为报告基因，以2-BNDG作为SGLT2作用底物而建立药物抗糖尿病评价体系，并通过计算2NBDG与EBFP2荧光比值初步评价药物对SGLT2抑制效果，间接评估药物可能的抗糖尿病作用。

7.根据权利要求6所述的抗糖尿病药物筛选方法，其特征在于，步骤（2）中细胞模型的建立方法替换成通过包装含融合基因的腺病毒或慢病毒感染的方式建立。

8.根据权利要求6所述的抗糖尿病药物筛选方法，其特征在于，步骤（2）中所采用转染的细胞为ATCC来源人胚胎肾细胞HEK293。

9.根据权利要求6所述的抗糖尿病药物筛选方法，其特征在于，所述筛选方法是以过表达SGLT2蛋白作为药物靶标。

10.根据权利要求6所述的抗糖尿病药物筛选方法，其特征在于，步骤（1）中，以pCDNA3.1为基础骨架，在多克隆位点插入融合基因片段而获得过表达载体pBTS。