[发明专利]一种抗生素抗性基因检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，包括试剂盒盖(1)、试剂盒体(2)、八联管槽(3)、阳性内控品槽(4)、阳性内控品管(5)、试剂反应管(6)和阴性对照反应管(7)，所述试剂盒体(2)的顶部后方活动连接有所述试剂盒盖(1)，且所述试剂盒体(2)的内部开设有两个前后分布的所述八联管槽(3)，每个所述八联管槽(3)的内部均设有七个从左到右依次排布的所述试剂反应管(6)和位于一端的单个所述阴性对照反应管(7)，所述试剂盒体(2)的内部一侧开设有所述阳性内控品槽(4)，所述阳性内控品槽(4)的内部设有所述阳性内控品管(5)。

2.根据权利要求1所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于：所述阳性内控品管(5)预先加入阳性内控品用于对照，所述阳性内控品是多种合成的已知基因序列的DNA片段。

3.根据权利要求2所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于：所述阳性内控品包括抗生素抗性基因阳性内控品和内参基因阳性内控品。

4.根据权利要求2所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，阳性内控品管(5)中预先加入的每种阳性内控品DNA片段的终浓度为10⁶Copy/μL。

5.根据权利要求3所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，所述抗生素抗性基因阳性内控品对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.1-SEQ IDNO.21。

6.根据权利要求1所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，所述抗生素抗性基因包括tetG1、tetW、tnpA-2、sul1、sul2、blaTEM-1、ampc、ermX、acrB、aac(6')-lb-cr、aadA-01、strA、VanTC-02、vanXO、MexE、qac、intI-1、ISCR1、cmlA1、cmlB、floR。

7.根据权利要求1所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的基因检测方法为探针法荧光定量PCR或探针法数字PCR。

8.根据权利要求1所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，每一个试剂反应管(6)中预先加入三种不相互干扰的靶标抗性基因检测探针以及对应的三种靶标抗性基因检测引物，每种靶标抗性基因检测探针的5'端分别连接不同的荧光染料(FAM/VIC/ROX)标记的荧光报告基团，每种探针的3'端连接BHQ1荧光淬灭基团，阴性对照反应管(7)预先加入所有靶标抗性基因检测探针以及对应的靶标抗性基因检测引物。

9.根据权利要求7所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，每个试剂反应管(6)中预先加入的靶标抗性基因检测探针的序列、对应的靶标抗性基因检测引物的序列、以及对应的靶标抗性基因检测用探针连接的荧光基团选自下表所示的组合：

10.根据权利要求8所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，七个试剂反应管(6)中每管的加入的三种靶标抗性基因检测探针和靶标抗性基因检测引物对应的抗性基因的组合为：tetG1、tetW、tnpA-2一管，sul1、sul2、blaTEM-1一管，ampc、ermX、acrB一管，aac(6')-lb-cr、aadA-01、strA一管，VanTC-02、vanXO、MexE一管，qac、intI-1、ISCR1一管，cmlA1、cmlB、floR一管。

11.根据权利要求8所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，每个所述试剂反应管(6)和阴性对照反应管(7)中预先加入的每种靶标抗性基因检测引物终浓度为0.8μmol/L，每种靶标抗性基因检测探针终浓度为0.3μmol/L。

12.根据权利要求1所述的一种抗生素抗性基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒使用内参基因进行对照检测。