[发明专利]一种桃蚜浓核病毒、扩增和接头方法及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种桃蚜浓核病毒、扩增和接头方法及其应用，桃蚜浓核病毒名称为Myzuspersicaedensovirus2，简称MpDV2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为V202281。本发明提供的桃蚜浓核病毒MpDV2为从前未分离和鉴定过的对桃蚜有致病性的病毒毒株，首次公开桃蚜浓核病毒MpDV2的基因组全长序列(包含完整的末端反向重复序列)以及该病毒感染对桃蚜生长发育及种群动态/增长的影响。本发明的桃蚜浓核病毒MpDV2感染显著降低桃蚜种群的内禀增长率(r)、净繁殖率(Rsubgt;0/subgt;)、周限增长率(λ)，延长种群的平均世代时间(T)，MpDV2感染对桃蚜生长发育及种群增长有显著影响。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种桃蚜浓核病毒、全基因组扩增和接头方法及其应用。

背景技术

目前，桃蚜(Myzuspersicae(Sulzer))属于半翅目(Hemiptera)，蚜科(Aphididae)，是世界性害虫，在我国各省份以及世界各大洲均有分布。世界记载的桃蚜寄主植物有50科400多种，我国记载的有170多种。桃蚜是危害最重、食性最广的重要昆虫种类之一。通过成蚜、若蚜吸食寄主植物汁液进行直接危害，造成叶片卷缩、变薄，严重时抑制植物生长，易发生霉污病。此外，桃蚜还能传播多种重要的植物病毒，造成植物病害流行，在全球范围内造成严重危害和巨大的经济损失。

目前，控制桃蚜种群的有效途径主要依赖于化学合成杀虫剂。长期过量的化学杀虫剂使用导致多个地区的桃蚜种群都出现了针对多类化学农药的抗药性。此外，化学防治所造成的环境污染问题日益严重，人们对绿色、安全的病虫害防控方法的需求越来越迫切。近年来，采用生物防治方法控制病虫害越来越受到人们的青睐；其中，利用天敌、寄生昆虫、病原微生物等防控病虫害都属于生物防治的范畴。昆虫致病病毒作为一类病原微生物，对寄主有致死作用，且具有寄主专一性，对非靶标生物安全，利用这些生物学特性，可以为新型杀虫剂的开发提供理论指导。目前，已有多个国家对昆虫致病病毒的应用展开了研究，全球已有近20种昆虫病毒杀虫剂进入市场。

浓核病毒属于细小病毒科(Parvoviridae)中的浓核病毒亚科(Densovirinae)，仅感染无脊椎动物包括昆虫、虾蟹、海星等。浓核病毒粒子呈正二十面体对称(T＝1)、直径约为25nm、不具有囊膜，其内包含一条单链、线性基因组DNA，大小约为3.9～6.3kb。由于难以获得末端的发卡结构序列，部分浓核病毒的基因组精确大小尚不清楚。研究表明，大多数浓核病毒具有较高的毒力和有限的宿主范围，不感染脊椎动物或细胞。因此，该类病毒在农林业及卫生害虫防治中具有潜在的应用价值。2000年，我国注册登记了黑胸大蠊浓核病毒(Periplaneta fuliginosa densovirus，PfDV)作为微生物杀虫剂用于控制卫生害虫蟑螂。在此之前，苏联曾商品化生产埃及伊蚊浓核病毒(Aedes aegypti densovirus，AaeDV)控制蚊类幼虫。

2003年，vanMunster等人在荷兰的桃蚜种群中分离了一株浓核病毒(便于区分将该病毒株系称为桃蚜浓核病毒1，MpDV1)。病毒粒子的直径约为20nm。基因组序列分析表明，该病毒获得的片段大小为5.5kb、缺乏末端的重复序列或发夹结构。早期的研究表明，MpDV1接种感染后桃蚜的体重下降、发育历期延长、繁殖力显著降低。

桃蚜浓核病毒的生物安全性、宿主特异性及其致病性等特点使其具有防治桃蚜的潜在应用价值。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有控制桃蚜种群的方法中，长期过量的化学杀虫剂使用导致多个地区的桃蚜种群都出现了针对多类化学农药的抗药性，化学防治所造成的环境污染问题日益严重。急需研发出防控桃蚜的新方法，或开发出针对桃蚜的绿色、安全、环保的新型杀虫剂。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种桃蚜浓核病毒、扩增和接头方法及其应用，尤其涉及一种感染桃蚜Myzuspersicae(Sulzer)的浓核病毒。