[发明专利]用于检测多种生殖道微生态菌群的实时荧光定量PCR引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测多种生殖道微生态菌群的检测组合物，其特征在于，所述检测组合物包含检测放线菌Actinobacteriota、拟杆菌属Bacteroides、梭杆菌门Fusobacteria、乳杆菌属Lactobacillus、链球菌属Streptococcus、肠球菌属Enterococcus、气球菌属Aerococcus、葡萄球菌属Staphylococcus、孪生菌属Gemella、韦荣氏菌科Veillonellaceae、支原体科Mycoplasmataceae、梭状芽孢杆菌Clostridia、衣原体科Chlamydiaceae、肠杆菌科Enterobacteriaceae、阴道毛滴虫Trichomonas_vaginalis和真菌Fungi的一种或多种qPCR引物和探针；其中，放线菌、拟杆菌属、梭杆菌门、乳杆菌属、链球菌属、肠球菌属、气球菌属、葡萄球菌属、孪生菌属、韦荣氏菌科、支原体科、梭状芽孢杆菌、衣原体科、肠杆菌科、阴道毛滴虫和真菌上游引物分别为Act-F、Bac-F、Fus-F、Lac-F、Str-F、Ent-F、Aer-F、Sta-F、Gem-F、Vei-F、Myc-F、Clo-F、Chl-F、E1-F、Tri-F和Fun-F，其序列依次如SEQ ID NO.1～16所示；放线菌、拟杆菌属、梭杆菌门、乳杆菌属、链球菌属、肠球菌属、气球菌属、葡萄球菌属、孪生菌属、韦荣氏菌科、支原体科、梭状芽孢杆菌、衣原体科、肠杆菌科、阴道毛滴虫和真菌下游引物分别为Act-R、Bac-R、Fus- R、Lac-R、Str-R、Ent-R、Aer-R、Sta-R、Gem-R、Vei-R、Myc-R、Clo-R、Chl-R、E1-R、Tri-R和Fun-R，其序列依次如SEQ IDNO.17～32所示；检测放线菌、拟杆菌属、梭杆菌门、乳杆菌属、链球菌属、肠球菌属、气球菌属、葡萄球菌属、孪生菌属、韦荣氏菌科、支原体科、梭状芽孢杆菌、衣原体科、肠杆菌科、阴道毛滴虫和真菌的探针分别为Act-P、Bac-P、Fus-P、Lac-P、Str-P、Ent-P、Aer-P、Sta-P、Gem-P、Vei-P、Myc-P、Clo-P、Chl-P、E1-P、Tri-P和Fun-P，其序列依次如SEQ ID NO.33～48所示；上述探针的5’端标记有不同的荧光发射基团，3’端标记有淬灭基团。

2.如权利要求1所述的用于检测多种生殖道微生态菌群的检测组合物，其特征在于，Act-P的5’端荧光发射基团为Texas Red，3’端淬灭基团为BHQ1；Bac-P的5’端荧光发射基团为HEX，3’端淬灭基团为BHQ2、Fus-P的5’端荧光发射基团为HEX，3’端淬灭基团为BHQ2；Lac-P的5’端荧光发射基团为Texas Red，3’端淬灭基团为BHQ2；Str-P的5’端荧光发射基团为FAM，3’端淬灭基团为BHQ1；Ent-P的5’端荧光发射基团为HEX，3’端淬灭基团为BHQ2；Aer-P的5’端荧光发射基团为Texas Red，3’端淬灭基团为BHQ2；Sta-P的5’端荧光发射基团为FAM，3’端淬灭基团为BHQ1；Gem-P的5’端荧光发射基团为FAM，3’端淬灭基团为BHQ1；Vei-P的5’端荧光发射基团为Texas Red，3’端淬灭基团为BHQ2；Myc-P的5’端荧光发射基团为HEX，3’端淬灭基团为BHQ1；Clo-P的5’端荧光发射基团为FAM，3’端淬灭基团为BHQ2；Chl-P的5’端荧光发射基团为FAM，3’端淬灭基团为BHQ2；E1-P的5’端荧光发射基团为Texas Red，3’端淬灭基团为BHQ2；Tri-P的5’端荧光发射基团为FAM，3’端淬灭基团为BHQ1；Fun-P的5’端荧光发射基团为HEX，3’端淬灭基团为BHQ2。

3.一种用于检测多种生殖道微生态菌群的多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括权利要求1或2所述的用于检测多种生殖道微生态菌群的检测组合物。

4.如权利要求3所述的所述用于检测多种生殖道微生态菌群的多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括含有Mg²⁺的PCR反应缓冲液、dNTP、以及PCR扩增酶。