[发明专利]一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用。该填料制备方法包括以下步骤：将预先配置的分散剂水溶液和交联剂、致孔剂、引发剂混合液加入到反应釜中，升温至45～55℃聚合1～4小时，形成聚合物微球；继续滴加引发剂、功能单体和模板分子混合液，升温至70～85℃，反应得到产物微球；再用刻蚀的方法除去部分模板分子，形成的特异性空穴对氨基糖苷类物质有很好的选择性，同时残留的部分壳聚糖分子对于基质中常见的干扰物磷脂有一定的吸附作用，去磷脂率高达89.62％，可提高检测灵敏度，降低磷脂对昂贵的色谱仪器的损害。

技术领域

本发明涉及固相萃取柱材料的制备领域，具体涉及一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用。

背景技术

氨基糖苷类抗生素(aminoglycosides,AGs)具有广谱抗菌特性，但其具有明显的副作用，比如神经肌肉传导阻滞，肠道功能损害以及耳毒性、肾毒性等，并且会在生物组织中富集，残留时间较长。AGs的主要结构包括氨基糖和1,3－二氨基肌醇，二者通过苷键连接，由于1,3－二氨基肌醇具有碱性多元环己醇结构，AGs通常具有较强的碱性和极性，易溶于水且与样品基质结合紧密，样品提取后净化难度大，现有的文献方法多采用固相萃取技术，常用的有C18、HLB和WCX等通用型固相萃取柱，但其专属净化效果不强，样品基质干扰严重，导致方法灵敏度差，回收率不稳定。

相比于传统固相萃取技术，免疫亲和柱净化和分子印迹聚合物固相萃取吸附剂对氨基糖苷的提取更具优势。氨基糖苷免疫亲和柱净化是以氨基糖苷类抗生素多克隆抗体为配基制备IAC，通过抗原抗体之间特异性的分子识别而建立的分离萃取技术，具有特异性好、净化彻底和样品富集效率高等优点。

专利文献CN108479113A公开了一种氨基糖苷类抗生素免疫亲和柱的制备方法，将环氧氯丙烷活化后的琼脂糖凝胶为载体，偶联上基因重组蛋白G，再连接氨基糖苷类抗生素抗体，最后用交联剂进行交联，得到抗体-蛋白G-sepharose填料，整个操作步骤繁琐，不适用于批量生产的需求，且免疫亲和柱多是单一型柱，即一次只能测定一种药物含量，不具有普遍适用性。

此外应用较多的是氨基糖苷分子印迹聚合物固相萃取吸附剂，以氨基糖苷类抗生素为模板分子，对具有氨基糖苷类似结构的目标化合物可进行选择性吸附。田一方等采用沉淀聚合法制备了阿米卡星印迹微球，对多种氨基糖苷目标物有一定的吸附效果，但是需要对模板剂进行抽提，脱除模板剂，操作较繁琐，制备的微球粒径在0.3～0.5微米，粒径过小不适用于固相萃取小柱的前处理中(田一方等.阿米卡星印迹微球的制备及其性能[J].河北大学学报(自然科学版),2015,35(03):258-264)。

中国专利文献CN109908874B公开了一种新型MoS₂QDs@MIPs分子印迹聚合物的制备方法，先制备量子点MoS₂QDs，再通过将阿米卡星嵌入到二氧化硅壳中包裹在MoS₂QDs核上得到量子点复合物，最后将量子点复合物中的阿米卡星洗脱下来，制备出阿米卡星空间印迹位点的分子印迹聚合物MoS₂QDs@MIPs。此种方式步骤繁琐，且仅对阿米卡星有选择性吸附，制备的聚合物粒径在15-50nm之间，不适用于固相萃取柱。

发明内容

本发明的目的是提供一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用，填料制备过程简单，产品稳定性、重现性好；可以起到对目标物富集和磷脂除杂的双重作用，对于兽残检测中的氨基糖苷类物质的富集与分离有着意想不到的效果。