[发明专利]一种细胞保存液及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种细胞保存液及其制备方法和应用，涉及细胞生物学和医学检测技术领域。该细胞保存液包括缓冲液、抗凝剂、非离子型表面活性剂、离子型去垢剂、渗透压维持剂和防腐剂，本发明还提供了一种细胞保存液的制备方法及其在细胞保存中的应用，细胞经该细胞保存液保存后进行核酸提取，能够有效获得高质量的核酸产物，为低样本量的核酸检测提供更高的检测灵敏度，同时该细胞保存液在室温下性能稳定，有效延长了样本的保存周期。

技术领域

本发明属于细胞生物学和医学检测技术领域，具体涉及一种细胞保存液及其制备方法和应用。

背景技术

核酸的分离是现代科学的重要成果之一，它给人类生活带来了巨大的进步。随着高通量和自动化提取技术的应用，大大简化了核酸的分离过程。当前的核酸检测技术在环境监测、疾病的筛查或诊断方面有着广泛的应用，并可以对癌症患者的术后复发情况进行监测，为临床医生及时做出诊断并在指导用药方面提供重要的参考。如HPV核酸检测在宫颈癌筛查中发挥着很大的作用，并在宫颈癌预防的各个领域均已得到证实。同时，Hp的核酸检测在胃病诊断方面也发挥着重要的作用，在诊断患者感染Hp的同时,根据患者基因突变情况指导临床医生合理进行用药。

在现有市场上，检测病原体、组织及血液等样本核酸的方法主要有聚合酶链式反应技术、基因芯片、原位杂交和各种测序等技术手段。无论运用哪种技术方法进行核酸检测，需尽可能获得高质量的核酸产物，尤其在样本量较低的情况下对核酸回收显得尤为重要。但当前市场对核酸回收的影响主要是从提取试剂的角度进行考量，却经常忽视不同的保存方法对同一样本回收效率的影响。

因此，在核酸检测领域中细胞的保存是至关重要的，因为它将直接影响核酸的质量和后续的检查结果。目前国内外许多厂家已经研发出多种细胞保存液来保证细胞的活性及细胞中DNA的完整性。但大多数的细胞保存液用于细胞学检测，能够很好地保存细胞结构，却对于核酸的保存质量存在一定的不足。并且现有大多数细胞保存液样本保存时间较短，核酸降解严重，导致检出率较低而影响检测结果的判断。

在公开号为CN101999343A的专利申请中，提供了一种细胞保存液，包括固定剂、固定剂辅助剂、抗凝剂、缓冲液、以及离子维持剂，其中：固定剂为甲醇、乙醇或异丙醇(45％-60％，v/v)、固定剂辅助剂为醋酸或醋酸盐(0.1％-15％，w/w)、抗凝剂为EDTA或EDTA的水溶性盐(0.01％-1.5％，w/w)、缓冲液为磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液等、以及离子维持剂为NaCl或KCl(0.01％-1％，w/w)，虽然能够有效地保存DNA，但保存时间不够长，核酸回收质量较低。

在公开号为CN114097771A的专利申请中，提供了一种细胞保存液，包括质量浓度为0.002％-0.01％的热休克蛋白、体积分数为0.2％-3％的200mM的谷氨酰胺、质量浓度为1％-5％的依达拉奉、质量浓度为1％-3％的海藻糖含量为和体积分数为93％-98％的磷酸盐缓冲液，可以有效地保护细胞活性，但在2-8℃下保存时间较短，核酸回收质量偏低。

基于上述问题，本发明提供了一种细胞保存液，该细胞保存液能够有效的获得高质量的核酸产物，为低样本量的核酸检测提供更高的检测灵敏度。同时该试剂在室温下性能稳定，有效延长了样本的保存周期。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种细胞保存液及其制备方法和应用。本发明提供的细胞保存液在相同条件下能够有效保护细胞内核酸功能完整性，并获得较高的核酸质量，在室温条件下可稳定保存细胞核酸长达9个月。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一方面，本发明提供了一种细胞保存液。

具体地，所述的细胞保存液包括缓冲液、抗凝剂、非离子型表面活性剂、离子型去垢剂、渗透压维持剂和防腐剂。