[发明专利]高纯度效应免疫细胞群及其培养方法、试剂组合物和应用

权利要求书

1.利用试剂组合物培养高纯度效应免疫细胞的方法，其特征在于，所述试剂组合物包括包被液、活化培养基和扩增培养基；所述包被液为终浓度为10-50ug/ml的RetroNectin；所述活化培养基由无血清培养基、终浓度为200-1000ng/ml的CD3单抗、终浓度为20-100ng/ml的IL-15、终浓度为20-100ng/ml的IL-21和终浓度为200-1000U/ml的IL-2组成；所述扩增培养基由无血清培养基和终浓度为200-1000U/ml的IL-2组成；所述方法包括以下步骤：

S1：细胞培养瓶包被RetroNectin；

S2：使用淋巴细胞分离液分离血液样本，获得单个核细胞；

S3：将S2所得细胞接种到包被RetroNectin的细胞培养瓶中，进行活化培养；

第一天，添加含有体积百分含量为10%血清替代物的活化培养基培养细胞；

第四天，补加含有体积百分含量为5%血清替代物的活化培养基继续培养；

第六天，补加含有体积百分含量为2%血清替代物的扩增培养基继续培养；

S4：培养至14天，收集对数生长的免疫细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化培养基由无血清培养基、终浓度为400-800ng/ml的CD3单抗、终浓度为30-90ng/ml的IL-15、终浓度为30-90ng/ml的IL-21和终浓度为500U/ml的IL-2组成；所述扩增培养基由无血清培养基和终浓度为500U/ml的IL-2组成。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包被液为终浓度为50ug/ml的RetroNectin。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3中，细胞活化培养第六天后，每两天检测细胞密度，并补加不含有血清替代物的扩增培养基继续培养细胞，保持细胞密度不低于1.0×10⁶个/mL。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3中，所述含有5%血清替代物的活化培养基的添加量为所述细胞培养瓶中原培养基的三倍体积；所述含有2%血清替代物的扩增培养基的添加量为所述细胞培养瓶中原培养基的二倍体积。

6.采用权利要求1所述的方法培养得到的免疫细胞群。

7.根据权利要求6所述的免疫细胞群，其特征在于，所述免疫细胞群中，效应细胞为CD3+CD56+细胞和CD3+CD8+细胞；所述CD3+CD56+细胞比例不低于总细胞的70%；所述CD3+CD8+细胞比例不低于CD3+细胞的85%。

8.权利要求6-7任一所述的免疫细胞群在制备杀伤慢性髓性白血病细胞K562的试剂中的应用。

9.权利要求6-7任一所述的免疫细胞群在制备用于治疗慢性髓性白血病的药物中的应用。