[发明专利]一种煅烧骨的制备方法

说明书

本发明公开了一种煅烧骨的制备方法。首先取异体骨去除软组织、粗切割，NaOH溶液、过氧化苯甲酰水溶液和苹果酸水溶液浸泡去除免疫原和部分杂质，然后一次低温煅烧，煅烧后采用乳酸钙和苏糖酸钙的混合溶液浸泡，最后二次高温煅烧制成。本发明制备的煅烧骨具有较高的抗压强度和抗折强度，植入体内不会产生炎症反应，生物相容性高。本发明采用二次煅烧技术，一次煅烧前采用过氧化苯甲酰水溶液和苹果酸水溶液先后清洗，二次煅烧前加入乳酸钙和苏糖酸钙的混合溶液浸泡的关键步骤，使得制备的材料强度增强，生物相容性提高，适用于骨移植。

技术领域

本发明属于异体骨制备技术领域，具体涉及一种煅烧骨的制备方法。

背景技术

不同原因造成的骨缺损，临床医生需要选择优质的植骨材料。常用的移植材料包括自体骨、异体骨、异种骨和人工骨等。自体骨取骨会给伤者造成二次损伤，新的损伤会有加重失血、感染的风险，并增加术后并发症。人工骨的成分和结构均不如天然骨，往往成骨活性较差。异种骨与人体骨组织具有相似的结构与形态，并且来源丰富、价格低廉，便于大量的获取和加工贮存，是未来骨移植材料发展的重要方向。但是异种骨的免疫排斥反应一直以来是棘手的问题，所以去抗原降低免疫原性成为异种骨应用的关键。

国内常用的骨脱蛋白方法有化学试剂浸泡脱蛋白法、酶类脱蛋白法等。酶类脱蛋白法作用较温和，但效果不太明确。化学试剂浸泡法中，次氯酸钠溶液在骨组织工程早期就被广泛用于异种骨的脱蛋白处理，去蛋白的效果也得到了确切的证实，但仍存在以下不足：①脱蛋白后的材料上往往有含氯的残留物；②渗透性较差，不能保证被处理骨块内外脱蛋白的均一性；③电子扫描显微镜下可以见到其对松质骨支架有较强的侵蚀作用。进行脱细胞处理也可以达到异种骨降低抗原的目的。有研究在氯仿与甲醇混合液脱脂的基础上，设计使用Triton X-100与脱氧胆酸钠联合脱细胞，发挥两者高效脱细胞的优势，虽然增加脱细胞的效能，而且保留原骨组织的天然孔隙结构，但最终不能将细胞及其细胞器成分完全脱去。物理脱细胞方法也随着超声技术在细胞破碎、超声洗涤等生物研究领域的应用迅速发展，很多学者开始尝试将超声技术用于异种骨的脱细胞处理。超声脱细胞主要是通过其对细胞的裂解作用完成的。单独应用超声脱细胞技术通常无法完全脱细胞且过强又可能会破坏细胞外基质(ECM)。此外，还有α-半乳糖苷酶处理、深低温冷冻、反复冻融等方法可以用来去抗原，但效果都不尽如人意。

国产的异种骨材料包括天津的金世植骨灵，上海的金骨威，西安的骼瑞、烟台海奥骨粉等，成骨性能均存在不够稳定或免疫原性不能满足临床需求的问题。而国内市场应用最为广泛的是瑞士的Geistlich Bio-Oss骨粉，其性质稳定，成骨能力良好，但是价格昂贵，其工艺的具体参数因并不明确，多年来国内外的众多研究都未能成功制出超越其性能的异种骨产品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种煅烧骨的制备方法。

一种煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：

(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸10-25min，降温至室温；然后在NaOH溶液中摇床室温清洗20-35min，纯化水超声清洗10-25min，重复上述清洗步骤1-3次；

(2)在过氧化苯甲酰水溶液清洗20-35min，用纯化水再次清洗15-25min，然后在苹果酸水溶液，清洗20-35min，用纯化水再次清洗15-25min；重复上述清洗步骤1-3次；

(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至600-700℃，维持5-10h，随炉冷却；

(4)将煅烧后的骨条浸入乳酸钙和苏糖酸钙的混合溶液中，60-80℃的水浴箱中浸泡60-80h；

(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至800-1000℃，维持5-8h，再次随炉冷却，制成。

步骤(1)所述NaOH溶液的浓度为0.5-1.5mol/L。