[发明专利]通过调节磷酸浓度和添加方式提高重组胶原蛋白发酵水平的工艺在审
| 申请号： | 202211407734.2 | 申请日： | 2022-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN116064706A | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 黄建民;朱逸丽;赵健烽;吴迎;孙圣;徐鹏程;刘宇乾;刘柯;张力薇 | 申请（专利权）人： | 江苏江山聚源生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K14/78;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 南京理工大学专利中心 32203 | 代理人： | 刘海霞 |
| 地址： | 214500 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 通过 调节 磷酸 浓度 添加 方式 提高 重组 胶原 蛋白 发酵 水平 工艺 | ||
1.通过调节磷酸浓度和添加方式提高重组胶原蛋白发酵水平的工艺，其特征在于，包括以下步骤：
将表达重组胶原蛋白的毕赤酵母菌种液接种到灭菌的低磷酸浓度的发酵培养基中，基础培养12～16小时后，开始流加50％甘油至目标菌体湿重，甘油流加结束后，开始流加甲醇实施诱导表达，同时流加85％磷酸溶液，流加速度为12.396ml/h～27.892ml/h，所述的低磷酸浓度的发酵培养基的组成如下：85％H3PO4 8.9～12.816ml/L，CaSO4·2H2O0.392～1.175g/L，K2SO4 6.11～18.2g/L，MgSO4·7H2O 5.6～18.2g/L，KOH 1.326～4.13g/L，甘油13.5～40.0g/L，PTM1溶液1.029～4.35ml/L。
2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，85％磷酸的流加速度为12.396～20.144ml/h。
3.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，表达重组胶原蛋白的毕赤酵母菌为巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris JY0201，保藏编号为CGMCC No.16461。
4.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述的PTM1溶液的配方为：CuSO4·5H2O6.0g/L，NaI 0.08g/L，MnSO4·H2O 3.0g/L，NaMoO4·2H2O 0.2g/L，H3BO30.02g/L，CoCl0.5g/L，ZnCl2 20.0g/L，FeSO4·7H2O 65.0g/L，生物素0.2g/L，H2SO45ml/L。
5.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，表达重组胶原蛋白的毕赤酵母菌的种液的接种量为8～10％，发酵温度为28～32℃，氨水调节pH为4.8～6.5，基础培养阶段，发酵培养基的溶氧不低于30％。
6.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，甲醇诱导阶段，发酵培养基的溶氧不低于10％，诱导时间为80～120h。
7.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，甲醇诱导阶段的诱导时间为80～112h。
8.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，50％甘油流加阶段的目标菌体湿重为190～220g/L。
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