[发明专利]一种产斑蝥黄工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，其能发酵生产斑蝥黄，所述基因工程菌包含编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸编码来源于Bradyrhizobium sp.ORS278的酮化酶。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸为适于酵母表达而密码子优化的多核苷酸，优选的，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸的序列如SEQ ID NO:91所示。

3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌还包含GGS1、tHMGR、carB、carRP中的至少一个。

4.如权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，包括以下1)～5)之至少一项：

1)所述基因工程菌为酵母；

2)所述GGS1的多核苷酸的序列如SEQ ID NO:94所示；

3)所述tHMGR的多核苷酸的序列如SEQ ID NO:95所示；

4)所述carB的genebank登录号AJ238028；

5)所述carRP的genebank登录号AJ250827。

5.如权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸、GGS1、tHMGR、carB、carRP中的至少一个为多拷贝。

6.如权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸的拷贝数为两个，所述GGS1的拷贝数为三个，所述tHMGR的拷贝数为两个，所述carB的拷贝数为四个，所述carRP的拷贝数为四个。

7.如权利要求6所述工程菌，其特征在于，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸、GGS1、tHMGR、carB、carRP的两端还连接有启动子和终止子。

8.权利要求7所述的工程菌，其特征在于，所述的启动子选自TEFp、EXPp、GDPp，所述的终止子选自PEXt、XPRt、LIPt，所述启动子、终止子来源于酵母。

9.如权利要求1-8任一项所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌选自MC-CTX1-BSW、MC-CTX2、MC-CTX3、MC-CTX4中的一种或几种。

10.如权利要求1～8任一项所述的基因工程菌在发酵生产斑蝥黄中的应用。

11.一种产斑蝥黄的发酵方法，其特征在于，将如权利要求1～8任一项所述的基因工程菌接种于发酵培养基，发酵获得所述斑蝥黄。

12.一种编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸在构建产斑蝥黄基因工程菌中的用途，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸编码来源于Bradyrhizobium sp.ORS278的酮化酶。

13.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸为适于酵母表达而密码子优化的多核苷酸，优选的，所述编码β-胡萝卜素酮化酶的多核苷酸的序列如SEQ ID NO:91所示。