[发明专利]一种用于qRT-PCR检测循环microRNAs的氧化石墨烯及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种氧化石墨烯的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)将石墨粉、硝酸钾和浓硫酸混合，得体系1；

(2)将高锰酸钾、硝酸钾和浓硫酸混合，得体系2；

(3)将体系2加入体系1中反应得含嵌锰石墨的反应液；

(4)待嵌锰石墨沉淀后，去除上清液，在得到的嵌锰石墨中加入水；

(5)在步骤(4)中，加入H₂O₂搅拌，得到氧化石墨烯原液；

(6)将制备得到的石墨烯原液透析，得到氧化石墨烯。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述石墨粉和硝酸钾的重量份为石墨粉0.1～1份、硝酸钾0.1～1份；和/或，所述石墨粉和浓硫酸的重量体积份为石墨粉0.1～1重量份、浓硫酸10～50体积份；

和/或，步骤(2)中，所述高锰酸钾和硝酸钾的重量份为高锰酸钾1～10份、硝酸钾1～5份；和/或，所述高锰酸钾和浓硫酸的重量体积份为高锰酸钾1～10重量份、浓硫酸10～50体积份；

优选地，

步骤(1)中，所述石墨粉和硝酸钾的重量份为石墨粉0.5份、硝酸钾0.5份；和/或，所述石墨粉和浓硫酸的重量体积份为石墨粉0.5重量份、浓硫酸23体积份；

和/或，步骤(2)中，所述高锰酸钾和硝酸钾的重量份为高锰酸钾6份、硝酸钾1份；和/或，所述高锰酸钾和浓硫酸的重量体积份为高锰酸钾6重量份、浓硫酸46体积份。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述将体系2加入体系1中是将体系2和体系1搅拌后，将体系2分批加入体系1中；和/或，所述反应为室温搅拌过夜；

和/或，步骤(4)中，所述嵌锰石墨和水的体积比为1∶3；

和/或，步骤(5)中，所述加入H₂O₂的浓度为30％；和/或，所述加入H₂O₂与嵌锰石墨的体积比为1∶2；和/或，所述加入H₂O₂搅拌的时间为1～5分钟；

和/或，步骤(6)中，所述透析的方法为将氧化石墨烯原液置于3500Da透析袋内，置于pH为7.0的去离子水中透析至透析袋内溶液pH为7.0。

4.一种氧化石墨烯，其特征在于：它是采用权利要求1～3任一项所述的方法制备而得。

5.权利要求4所述的氧化石墨烯用于qRT-PCR检测循环microRNA中的用途；

优选地，所述microRNA为microRNA-21、microRNA-155和/或microRNA-195；

更优选地，所述microRNA为microRNA-21时，引物为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

和/或，所述microRNA为microRNA-155时，引物为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；

和/或，所述microRNA为microRNA-195时，引物为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

6.一种qRT-PCR检测循环microRNA的方法，其特征在于：它包括如下方法：

1)将权利要求4所述的氧化石墨烯与引物一起孵育；

2)配制qRT-PCR反应体系，进行实时荧光定量PCR；

优选地，

步骤1)中，所述氧化石墨烯与引物的质量比为1～6∶1；

和/或，步骤1)中，所述氧化石墨烯使用水稀释至的浓度为4.77～32.52μg/mL；

和/或，步骤1)中，所述孵育的温度为15～35℃，孵育时间为30±5min；

更优选地，

步骤1)中，所述氧化石墨烯与引物的质量比为4∶1；

和/或，步骤1)中，所述引物中正向引物和反应引物的摩尔比为1∶1；

和/或，步骤1)中，所述氧化石墨烯使用水稀释至的浓度为7.86μg/mL；

和/或，步骤1)中，所述孵育的温度为25℃，孵育时间为30min。