[发明专利]一种调控真菌生长的胞外蛋白CFEM85及其应用

说明书

本发明公开了一种调控真菌生长的胞外蛋白CFEM85及其应用。其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。本发明在金龟子绿僵菌上敲除CFEM85基因，获得了一个绿僵菌突变株，初步验证了CFEM85基因在维持绿僵菌生理特性中的作用，为后续对该蛋白功能研究和利用提供参考，此外，由于其突变株对昆虫的侵染速度加快，其菌株可作为一种生物材料，对推进昆虫病原真菌绿色防控。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种调控真菌生长的胞外蛋白CFEM85及其应用。

背景技术

昆虫病原真菌是一类重要的生防微生物，具有主动侵染、寄主不易产生抗性、生存条件多样和寄主间扩散效果可观等突出优点，引起了国内外生防工作者的广泛关注。金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是这类杀虫真菌的典型代表，目前在农林害虫和地下害虫的防治中己被广泛研究与应用。在具有众多有点的同时，绿僵菌的应用效果也受到干旱、高温、紫外线辐射和化学农药施用等环境因素影响。在绿僵菌的应用中，以分生孢子为主要形态进行施用。分生孢子的细胞壁涉及寄主的附着,形态建成等多种生理功能，细胞壁表面蛋白在病原性真菌的抗逆及侵染致病过程中发挥着非常重要的作用。所以需要对控制真菌生物学特性的基因进行探究及改良，对绿僵菌作为绿色可持续发展的微生物制剂方面进行突破。

研究发现富含半胱氨酸的疏水蛋白能够形成疏水壁涂层，在真菌形态发生中是必不可少，CFEM(common in several fungal extracellular membrane protein)蛋白是常见于真菌的胞外膜蛋白，该蛋白结构通常含有约60个氨基酸，8个保守的半胱氨酸形成四对二硫键，类似于表皮生长因子(EGF)样结构域，在毒力的发挥，维持真菌生物膜的稳定性，形成侵染结构等方面起作用。CFEM蛋白家族成员繁多，其结构与功能不尽相同，大多在植物病原菌中被研究报道。例如，稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)Pth11，一个含有CFEM域的G蛋白偶联受体，是稻瘟菌附着胞的形成，发育和致病性的必要条件(Kou et al.2017)；而在灰葡萄孢(Botrytis cinerea)中，BcCFEM1蛋白影响灰葡萄孢的毒力、分生孢子的产生和抗胁迫能力(Zhu et al.2017)，在烟曲霉(Aspergillus fumigatus)中，CFEM蛋白参与了细胞壁的稳定，对毒力的发挥无影响(Vaknin et al.2014)。在动物病原菌中，白色念珠菌(Candidaalbicans)中含有CFEM结构域的真菌蛋白(Pga10p/Rbt51p、Rbt5p和Wap1p/Csa1p)被认为与生物膜结构的形成、发展和/或维持有关(Perez et al.2006)，另外，白色念珠菌Csa2(利用血红蛋白作为铁源)和光滑念珠菌(Candida glabrata)CFEM结构域蛋白CgCcw14，对维持细胞内铁含量，粘附上皮细胞和毒性起重要作用(Srivastava,Suneetha and Kaur 2014,Okamoto-Shibayama et al.2014)。但CFEM蛋白是否会影响昆虫病原真菌绿僵菌的萌发生长，产孢以及菌株的毒力，目前尚未有相关的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种调控真菌生长的胞外蛋白CFEM85及其应用。

一种调控真菌生长的胞外蛋白CFEM85，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

所述调控真菌生长的胞外蛋白CFEM85的基因，其核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：2所示。

一种金龟子绿僵菌CFEM85敲除菌株。

所述金龟子绿僵菌CFEM85敲除菌株在提高杀虫毒力中的应用。

所述虫为家蚕、大蜡螟或桃蚜。

一种金龟子绿僵菌CFEM85敲除菌株的构建方法，按照如下步骤进行：