[发明专利]一种耐热的重组溶菌酶及其与多苞桉桉树精油制备的防腐剂和应用

说明书

本发明一种耐热的重组溶菌酶及其与多苞桉桉树精油制备的防腐剂和应用。所述重组溶菌酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，其酶活水平是原始溶菌酶的2.5倍，对金黄色葡萄球菌、魏氏梭菌、无乳链球菌等革兰氏阳性菌、大肠杆菌、沙门氏菌有抑制作用，同时具有良好的耐热性且无溶血活性，其与具有抑菌杀虫作用的多苞桉桉树精油混合制备得到了能够延长食品保存期，起到很好的防腐保鲜作用的防腐剂，使其在食品等领域有具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于酶工程领域，具体涉及一种耐热的重组溶菌酶及其与多苞桉桉树精油制备的防腐剂和应用。

背景技术

溶菌酶广泛存在于人体多种组织中，以及鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液、血浆、乳汁中。溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解细菌中黏多糖的碱性酶，其主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解，进而具有抑菌作用。但天然来源的溶菌酶一般活性较低，需要较高的添加量才会具有比较理想的抑菌效果，因此在“替抗”的环境下，寻找或设计安全、抑菌效果好的溶菌酶是亟待解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种耐热的重组溶菌酶及其与多苞桉桉树精油制备的防腐剂和应用。所述重组溶菌酶对大部分革兰氏阳性菌、大肠杆菌、沙门氏菌有抑制作用，同时具有良好的耐热性且无溶血活性，其与具有杀菌作用的多苞桉桉树精油制备的防腐剂在食品防腐保鲜中具有很好的效果。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种耐热的重组溶菌酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供了一种编码基因，其为所述的重组溶菌酶的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了一种重组表达载体，其包含所述的编码基因。

本发明还提供了一种重组工程菌，其包含所述的编码基因。

本发明还提供了一种防腐剂，其中含有所述的重组溶菌酶酶液和多苞桉桉树精油。

进一步的，所述重组溶菌酶酶液与多苞桉桉树精油的体积比为5:1～5。

本发明还提供了所述的重组溶菌酶在用于制备抑菌剂中的应用。

进一步的，所述抑菌剂抑制的致病菌为金黄色葡萄球菌、魏氏梭菌、无乳链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌。

本发明还提供了所述的重组溶菌酶或者权利要求5所述的防腐剂在用于食品防腐保鲜中的应用。

进一步的，所述重组溶菌酶或者所述防腐剂中含有的重组溶菌酶的浓度为0.1g/mL～0.3g/mL。

与现有技术相比，本发明的优点和有益技术效果是：

本发明以枯草芽孢杆菌来源的溶菌酶基因为基础，通过优化基因序列和随机突变后，筛选获得了酶活高于原始溶菌酶的重组溶菌酶LysM1，其酶活水平是原始溶菌酶的2.5倍，并且重组溶菌酶LysM1对金黄色葡萄球菌、魏氏梭菌、无乳链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌具有很好的抑菌效果，其还具有良好的耐热性，适合于饲料酶在生产过程中的高温操作，同时该重组溶菌酶没有溶血活性，为其产业化应用及产品推广奠定基础。

本发明还将重组溶菌酶LysM1与具有抑菌杀虫作用的多苞桉桉树精油混合制备得到了能够延长食品保存期，起到很好的防腐保鲜作用的防腐剂，使其在食品等领域有具有良好的应用前景。

附图说明

图1是重组溶菌酶基因PCR结果。

图2是重组溶菌酶摇瓶发酵产酶水平。