[发明专利]一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品的制备方法，其特征在于，包括：

步骤一，采用超滤浓缩法制备波氏杆菌外膜囊泡；

步骤二，采用薄膜分散法结合超声法制备纳米地黄多糖免疫佐剂；

步骤三，将制得的波氏杆菌外膜囊泡和纳米地黄多糖免疫佐剂等体积混合后，通过装有聚碳酸酯膜的纳米粒挤压器进行融合，经挤压器来回挤压，即得细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品。

2.根据权利要求1所述的一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品的制备方法，其特征在于，所述超滤浓缩法为先将单个菌落进行扩大培养；再将扩大培养的滤液进行离心、过滤后超滤、浓缩；浓缩液离心后重悬，得波氏杆菌外膜囊泡。

3.根据权利要求2所述的一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品的制备方法，其特征在于，所述扩大培养时，培养液中添加头孢氨苄64μg/mL。

4.根据权利要求2所述的一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品的制备方法，其特征在于，所述过滤后超滤的条件为过滤是经过0.45μm的滤器；超滤装置的截留分子量为100kDa。

5.根据权利要求2所述的一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品的制备方法，其特征在于，所述重悬为TE缓冲液重悬或PBS缓冲液重悬。

6.根据权利要求1所述的一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品的制备方法，其特征在于，所述薄膜分散法结合超声法包括：

大豆卵磷脂、胆固醇和DSPE-PEG 2000溶于甲醇和氯仿混合液中，搅拌溶解，减压旋转蒸发除去有机溶剂；

瓶壁形成一层均匀的薄膜后，导入熟地多糖的水溶液，水化后继续旋蒸；瓶壁薄膜完全洗脱，加入ddH₂O继续旋转蒸发；

蒸发结束后，利用探头式超声细胞粉碎机进行超声粒径均一化处理，再将粒径均一化处理的溶液挤压过微孔滤膜，得纳米地黄多糖免疫佐剂。

7.根据权利要求6所述的一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品的制备方法，其特征在于，所述探头式超声细胞粉碎机得强度40％，10s开，10s停，工作时间2min。

8.根据权利要求1所述的一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品的制备方法，其特征在于，所述聚碳酸酯膜得粒径为200nm。

9.一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品，其特征在于，是由权利要求1-8任一方法制备而成。

10.一种细菌外膜囊泡-纳米地黄多糖产品在制备纳米亚单位疫苗中的应用。