[发明专利]一种小鼠条件性诱导Hmox1基因敲除模型的构建方法及应用

权利要求书

1.一种构建Hmox1诱导性基因敲除小鼠动物模型的方法，其特征在于，所述方法为：

(1)针对FloxP位点设计Cas9/gRNA和Donor DNA质粒；

(2)将Donor DNA质粒以及Cas9/gRNA植入野生型小鼠的受精卵中，并将受精卵移植至野生型小鼠，该小鼠产下仔鼠即F0代小鼠；

(3)将F0代小鼠与野生型小鼠杂交，获得F1代杂合子；

(4)将F1代杂合子互配，繁育得到F2代小鼠，即为Hmox1-FloxP小鼠；

(5)将Hmox1-FloxP小鼠与组织特异性表达Cre的小鼠杂交获得稳定遗传子代。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，在第二个外显子的两边定点插入FloxP位点。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第二外显子的氨基酸序列如SEQIDNO.28所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，gRNA的序列如SEQ ID NO.25或SEQ ID NO.26所示。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，利用显微注射技术将DonorDNA质粒以及Cas9/gRNA植入野生型小鼠的受精卵中。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)和(3)中，野生型小鼠的品系为C57BL/6。

7.根据权利要求1～6任一所述方法构建得到的小鼠在研究与Hmox1基因缺陷相关疾病中的应用，所述应用不以疾病的诊断或治疗为目的。

8.根据权利要求1～6任一所述方法构建得到的小鼠在筛选用于治疗或预防Hmox1基因相关疾病的药物中的应用，所述应用不以疾病的诊断或治疗为目的。

9.根据权利要求1～6任一所述方法构建得到的小鼠在研究Hmox1基因相关功能与作用机理中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用为研究Hmox1基因与海水淹溺性肺损伤的相关机理。