[发明专利]一株降解黄曲霉毒素菌株的筛选方法

说明书

本发明公开了一株降解黄曲霉毒素菌株的筛选方法，包括以下步骤：步骤1：培养基的制备；步骤2：从环境中取腐殖土、枯叶和枯木等样品加生理盐水稀释并摇匀，于种子培养基中培养；步骤3：吸取菌液于初筛培养基上，待长出菌落后接种于种子培养基中培养，观察浑浊情况；步骤4：将菌液涂板于初筛培养基上，再将上述步骤3和4重复3次，保存能以香豆素为碳源生长的菌株进行复筛选；步骤5：将初筛菌株在发酵培养基中培养，测定黄曲霉毒素降解率；步骤6：选择降解率最高菌株16S rDNA测序进行菌种鉴定。本发明提供了可快速筛选降解黄曲霉毒素菌株的方法，且提供了降解黄曲霉毒素的菌株为乳酸乳球菌，可以有效的对黄曲霉毒素进行降解，且降解率较高。

技术领域

本发明涉及微生物应用技术领域，尤其涉及一株降解黄曲霉毒素菌株的筛选方法。

背景技术

随着我国经济的不断发展，畜牧业是除农作物外的第二大农业产业，在农业经济中发挥着越来越突出的作用。饲料作为畜牧业养殖中非常重要的一环，近年来，饲料原料的污染给养殖业带来巨大损失，其中黄曲霉毒素污染占据较高的比例。黄曲霉毒素是黄曲霉等真菌产生的具有强毒、致癌的次级代谢产物，导致动物机体DNA突变，还可抑制DNA和RNA的合成，从而抑制蛋白质的合成，对肝脏具有很强毒性，从而降低动物生产性能，造成巨大经济损失，甚至黄曲霉毒素污染的产品进而危害人类健康。然而目前化学和物理方法处理黄曲霉毒素去除率低，且难以排除化学残留问题，而微生物技术处理具有高效，无毒，绿色等特点，因此我们我们选择微生物降解的新型方法解决和改善这一问题。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前微生物降解黄曲霉毒素的研究报道较少，并且筛选降解黄曲霉毒素菌株的方法未统一且菌株对黄曲霉毒素的降解率较低。

发明内容

1.要解决的技术问题

本发明的目的是为了解决现有技术中微生物降解黄曲霉毒素的研究报道较少，并且筛选降解黄曲霉毒素菌株的方法未统一且菌株对黄曲霉毒素的降解率较低的问题，而提出的一株降解黄曲霉毒素菌株的筛选方法。

2.技术方案

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一株降解黄曲霉毒素菌株，所述黄曲霉毒素降解菌为乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)，已于2022年08月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉)，保藏号为：CCTCCNO:M 20221340。

本发明中还提出了一株降解黄曲霉毒素菌株的筛选方法，包括以下步骤：

步骤1：培养基的制备，包括种子培养基、初筛培养基和发酵培养基的制备；

步骤2：从环境中取腐殖土、枯叶和枯木等样品加生理盐水稀释并摇匀，静止5分钟后吸取上清液于种子培养基中，在37℃下，恒温箱中培养72小时，观察浑浊情况；

步骤3：吸取菌液于初筛培养基上，在37℃下，恒温箱中培养1周，待长出菌落后接种于种子培养基中，在37℃下，恒温箱中培养72小时，观察浑浊情况；

步骤4：将菌液涂板于初筛培养基上，再将上述步骤3和4重复3次，保存能以香豆素为碳源生长的菌株进行复筛选；

步骤5：将初筛菌株在发酵培养基中37℃培养72小时，测定黄曲霉毒素降解率；

步骤6：选择降解率最高菌株16S rDNA测序进行菌种鉴定。

优选地，所述步骤1中种子培养基为营养肉汤(pH7.0)。