[发明专利]新冠病毒抗原检测试剂盒及其制备方法、应用

说明书

本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及新冠抗原检测试剂盒及其制备方法、应用。通过磁性金微球标记新冠病毒N蛋白抗体，配合免疫层析技术，实现了对新冠抗原的定性，定量检测，使用磁性金微球代替胶体金等传统标记物，使得检测信号转变成了三维模式，信号的利用率大大提高。本发明中将新冠抗原N蛋白抗体结合到磁珠上，形成磁性金微球标记新冠病毒N蛋白抗体，具有磁响应性，在磁力作用下，该微球发生力学移动，从而达到分离抗原的目的。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及新冠病毒抗原检测试剂盒及其制备方法、应用。

背景技术

胶体金免疫层析法(GICA)快速检测具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、检测时间短等特点，一般10分钟就能肉眼观察结果，而且操作简单，无需任何设备，特别适合现场的样品筛选。

由于胶体金的自身性质限制，GICA的检测结果只能存在有限的时间，对于结果的长期保存是不利的。而且GICA在硝酸纤维素膜中信号的呈现形式是二维模式，依靠观察色度来判定结果，信号直接在硝酸纤维素膜表面以颜色的形式呈现结果。而硝酸纤维素膜是个三维结构，这样，有一部分信号是无法检测到的，这样，限制了GICA用于定量检测。

磁微粒是近年来在受到广泛关注的标记材料。生物体系内极少出现具有磁性的物质，故而以磁性复合粒子作为标记物用于免疫层析的背景干扰极小，从提高灵敏度和定量分析角度看十分理想。

但太小的磁微粒无法提供足够的信号用于定量检测，而过大的磁珠会面临易团聚，尤其是在标记体积较大的新冠病毒N蛋白时，其单分散性更差。

此外，磁性免疫层析体系中的牵引力来自于NC膜的毛细作用力和吸水纸的吸引作用，而由磁球运动所产生的阻力则与磁球的直径成正比。粒径大的磁球阻力大，层析过程中的流速低，检测时间长。如果想要达到真正的快速检测，在选择磁球时，磁球粒径的大将成为重要的参考因素之一。然而，并非磁球的流速越快越好，过快的流速反而会引起灵敏度的降低。这是因为，在免疫层析检测中，抗原抗体间的反应时间并不像完全免疫反应如酶联免疫吸附试验那样充分，而是不完全免疫反应，如果流速过快，免疫反应时间太短，因而灵敏度会有所降低。

因此需要制备一种更适合新冠病毒N蛋白抗体标记的磁性微球来配合免疫层析技术，以达到定性定量检测新冠病毒抗原的目的。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种新冠病毒抗原检测试剂盒及其制备方法、应用；通过磁性金微球标记新冠病毒N蛋白抗体，配合免疫层析技术，实现了对新冠抗原的定性，定量检测，使用磁性金微球代替胶体金等传统标记物，使得检测信号转变成了三维模式，信号的利用率大大提高。本发明中将新冠抗原N蛋白抗体结合到磁珠上，形成磁性金微球标记新冠病毒N蛋白抗体，具有磁响应性，在磁力作用下，该微球发生力学移动，从而达到分离抗原的目的。

具体的，本发明的技术方案如下：

新冠病毒抗原检测试剂盒，包括试纸条和样品提取液，所述试纸条包括沿层析方向依次搭接的样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸；所述结合垫吸附有磁性金微球标记的新冠病毒N蛋白抗体；所述NC膜沿样品流动方向依次设有喷涂新冠病毒N蛋白抗体构成的T线、喷涂兔抗鼠IgG构成的C线；

所述磁性金微球标记的新冠病毒N蛋白抗体的制备方法包括以下步骤：

(1)水热法合成粒径为200nm～250nm的Fe₃O₄纳米颗粒，将Fe₃O₄纳米颗粒用CTAB溶液处理，得到水溶性Fe₃O₄纳米颗粒；

(2)水溶性Fe₃O₄纳米颗粒分散于水中，加入Au³⁺溶液，加入NH₂OH将Au³⁺还原为金原子，洗涤，得到磁性金微球；