[发明专利]新冠病毒抗原检测试剂盒及其制备方法、应用

权利要求书

1.新冠病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，包括试纸条和样品提取液，所述试纸条包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸，所述样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸沿层析方向依次搭接；所述结合垫吸附有磁性金微球标记的新冠病毒N蛋白抗体；所述NC膜沿样品流动方向依次设有喷涂新冠病毒N蛋白抗体构成的T线、喷涂兔抗鼠IgG构成的C线；

所述磁性金微球标记的新冠病毒N蛋白抗体的制备方法包括以下步骤：

(1)水热法合成粒径为180nm～220nm的Fe₃O₄纳米颗粒，将Fe₃O₄纳米颗粒用CTAB溶液处理，得到水溶性Fe₃O₄纳米颗粒；

(2)水溶性Fe₃O₄纳米颗粒分散于水中，加入Au³⁺溶液，加入NH₂OH将Au³⁺还原为金原子，洗涤，得到磁性金微球；

(3)磁性金微球用缓冲液溶解至2mg/ml，加入1.5mg/mL碳二亚胺和1.5mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺并快速混匀，在20～30℃孵育10～20min；

(4)将步骤(3)孵育后的溶液离心，去上清，加入50％(体积)Tris缓冲液重悬，按质量比，新冠病毒N蛋白抗体：磁性金微球＝1:10，加入新冠病毒N蛋白抗体，混匀，并25℃孵育4～6h；

(5)加入1％(质量)BSA在20～30℃下封闭1～1.5h；

(6)离心20～30min，去除未结合的抗体和BSA，得到磁性金微球标记的新冠病毒N蛋白抗体。

2.如权利要求1所述的新冠病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，所述结合垫的材质为玻璃纤维素膜，制备步骤包括：将玻璃纤维素膜于Tris缓冲液浸泡，取出烘干，将磁性金微球标记的新冠病毒N蛋白抗体喷涂到玻璃纤维素膜，烘干，得到结合垫。

3.如权利要求1所述的新冠病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，所述磁性金微球标记的新冠病毒N蛋白抗体的喷涂浓度为0.7μg/cm²。

4.如权利要求1所述的新冠病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫的材质为玻璃纤维素膜，由以下步骤制得：将玻璃纤维素膜于含有2.0％(质量)Triton X-100、2％(质量)BSA的Tris缓冲液浸泡，烘干，得到样品垫。

5.如权利要求1所述的新冠病毒抗原检测试剂盒，其特征在于，所述样品提取液中含有0.02mol/L PBS、0.05％(质量)Tween-20和1％(质量)BSA，pH＝7.4±0.2。

6.一种权利要求1所述的新冠病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：向结合垫上喷涂磁性金微球标记的新冠病毒N蛋白抗体；

S2：将新冠病毒N蛋白抗体在NC膜上喷涂制得T线，将兔抗鼠IgG在NC膜上喷涂制得C线；

S3：在依次搭接固定样品垫、结合垫、NC膜在底板上，外包卡壳，制备得试纸条，组合样本提取液，得到新冠病毒抗原检测试剂盒。

7.权利要求1所述的新冠病毒抗原检测试剂盒在检测新型冠状病毒中的应用。