[发明专利]一种包衣型乳杆菌的检测方法

说明书

本发明公开了一种包衣型乳杆菌的检测方法，具体步骤如下：S1配制BPW缓冲蛋白胨水稀释液；S2配制样品匀液；S3配制样品稀释液；S4平板培养；S5平板计数。本发明采用BPW缓冲蛋白胨水稀释液替代生理盐水，既可用于样品稀释液还可用于梯度稀释，有更强的缓冲效果，能够使包衣型乳杆菌更充分的释放和分散均匀，有利于提高包衣型乳杆菌在培养基中的生长率。

技术领域

本发明属于食品、药物分析领域，具体涉及一种包衣型乳杆菌 检测方法。

背景技术

嗜酸乳杆菌是乳酸菌家族中重要的一员，属于乳杆菌属的革兰 氏阳性杆菌，广泛存在于动物的肠道中。嗜酸乳杆菌能分泌抗生物 素类物质(嗜酸乳菌素(acidolin)、嗜酸杆菌素(acidophilin)、乳 酸菌素(laetocidon))，对肠道致病菌产生拮抗作用，具有调节肠道 菌群平衡、维护肠道健康和提高机体免疫力等功能，被认为是最理 想的替代抗生素的益生菌。

目前对于包衣型嗜酸乳杆菌的检测，虽然国家标准GB4789.35- 2016中提出了一种检测方法，使用生理盐水作为稀释液进行梯度稀 释，但是由于在梯度稀释过程中，不同的稀释液对双歧杆菌的计数 有着很大影响，所以现有GB4789.35- 2016并不能准确有效地的检测出包衣型嗜酸乳杆菌的数量。

发明内容

本发明涉的目的在于提供一种包衣型乳杆菌检测方法，采用BPW 缓冲蛋白胨水稀释液替代GB4789.35- 2016中的生理盐水，并采用两步稀释法对样品进行处理，使得其检出结果明显优于国标检测结果，且具有良好的再现性。

为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是:

一种包衣型乳杆菌的检测方法，具体步骤如下：

S1配制BPW缓冲蛋白胨水稀释液

称取一定质量的BPW缓冲蛋白胨水，并将其加入1000ml纯化水中 ，在121℃下高压灭菌15min后得到BPW缓冲蛋白胨水稀释液，备用；

S2配制样品匀液

称取一定量的样品与BPW缓冲蛋白胨水稀释液置于无菌均质袋中 ，并放入拍击式均质器中均质5- 6min，混匀，制成质量比为1:100的样品匀液；

S3配制样品稀释液

移取1.0ml的样品匀液置于含有9.0mlBPW缓冲蛋白胨水稀释液的 稀释管中，旋涡彻底混匀，依次类推作10倍递增稀释，直至最后的 稀释度满足每毫升获得30CFU-300CFU的菌落，并取最后2- 3个稀释度用于计数；

S4平板培养

分别从最后2～3个稀释管中取预设量的样品稀释液置于无菌培 养皿中，然后分别倒入冷却至45℃的培养基15～20ml，彻底混匀， 待培养基凝固后，将平板翻转，进行厌氧培养；

S5平板计数

选取步骤S4培养完成后菌落数在30CFU至300CFU之间的平板进行 计数。

优选地，所述步骤S1中，所述BPW缓冲蛋白胨水原料组分，按质 量份数计包括：

蛋白胨10份，氯化钠5份，十二水合磷酸氢二钠9份和磷酸二氢 钾1.5份。

优选地，所述步骤S1中，灭菌后的BPW缓冲蛋白胨水稀释液在25 ℃下pH为7.2±0.2。

优选地，所述步骤S1中，称取BPW缓冲蛋白胨水质量为20.0g。

优选地，所述步骤S2中，拍击式均质器的拍击速度为150- 200rpm。

优选地，所述步骤S2中，称取样品质量1.0g，BPW缓冲蛋白胨水 稀释液99.0g。