[发明专利]一种高效制备lncRNA编码小肽的多克隆抗体的方法

权利要求书

1.一种高效制备lncRNA编码小肽的多克隆抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对小肽EPC5进行了生物学分析；

(2)化学合成EPC5的核苷酸序列并设计引物，PCR扩增后连入载体构建EPC5原核融合表达载体；

(3)测序鉴定构建成功的重组质粒转化BL菌种IPTG诱导表达重组蛋白并利用载体的His标签进行纯化，SDS-PAGE检测抗原纯度；

(4)以纯化的重组蛋白与佐剂混合后免疫日本大耳兔并在免疫后获取抗血清并通过ELISA检测抗血清效价；

(5)纯化抗体，SDS-PAGE测定抗体纯化浓度，ELISA联合Western Blot探究成品抗体效价，稀释比例和特异性。

2.根据权利要求1所述的一种高效制备lncRNA编码小肽的多克隆抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中：

通过PSIPRED和Predict Protein分析EPC5的二级结构，PSIPRED网址为https://www.novopro.cn/tools/secondary-structure-prediction.html，Predict Protein网址为https://predictprotein.org；利用Swiss Model预测EPC5的三级结构，Swiss Model网址为https://swissmodel.expasy.org；利用SignalP-5.0对EPC5进行信号肽预测，SignalP-5.0网址为https://services.healthtech.dtu.dk/service.php？SignalP-5.0；基于PSORT II Prediction模型对EPC5的亚细胞定位进行分析，PSORT II Prediction模型网址为：https://psort.hgc.jp/form2.html。

3.根据权利要求1所述的一种高效制备lncRNA编码小肽的多克隆抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中，设计的引物为：

4.根据权利要求1所述的一种高效制备lncRNA编码小肽的多克隆抗体的方法，其特征在于，步骤(3)中，利用原核融合表达载体中的His标签进行蛋白纯化，纯化效率高、不影响目的蛋白的结构和功能且纯化成本低。

5.根据权利要求1所述的一种高效制备lncRNA编码小肽的多克隆抗体的方法，其特征在于，步骤(4)中，以纯化的重组蛋白与佐剂混合后免疫日本大耳兔并在第四次免疫一周后，即49d后，获取抗血清并通过ELISA检测抗血清效价。