[发明专利]一种瞬时靶向干扰HS3ST5基因表达的siRNA及其应用

说明书

本发明提供了一种瞬时靶向干扰HS3ST5基因表达的siRNA及其应用，属于干扰RNA技术领域。本发明提供了一种瞬时靶向干扰HS3ST5基因表达的siRNA，同时所述siRNA靶向干扰HS3ST5基因表达的试剂在制备抗病毒感染的药物中的应用。通过敲低HS3ST5基因或蛋白的表达，使宿主细胞对病毒的吸附、内化和病毒基因复制和子代病毒生成方面均有降低作用，可见本发明证明通过沉默HS3ST5基因表达或降低HS3ST5蛋白的表达能提高宿主细胞对病毒感染的抗性，从而为开发新型广谱抗病毒药物提供参考。

技术领域

本发明属于干扰RNA技术领域，具体涉及一种瞬时靶向干扰HS3ST5基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNAi)指双链RNA诱导产生的基因沉默现象。小干扰RNA(siRNA)的概念于1999年被首次提出，科研人员发现植物中自然产生的siRNA能引起转录后的基因沉默。siRNA长约21～25bp，可特异性与目的基因转录产物mRNA结合并使之降解，从而产生靶向干扰基因表达的作用。siRNA的作用机制为：携带有外源siRNA的序列或细胞内源性RNA被Dicer酶分解形成功能性siRNA序列，随后与细胞中的蛋白组成RNA诱导的沉默复合物(RISC)，siRNA序列引导RISC识别结合并酶切靶标mRNA，产生干扰蛋白表达的效应，最终siRNA被细胞质中的核酸酶非特异性的降解。siRNA的这种易被核酸酶降解的特性一直以来限制了siRNA在临床疾病治疗中的应用，近期FDA批准了首个siRNA衍生疗法，表明siRNA介导的基因治疗正在向临床应用过度。随着新型核酸递送介质的加速研发，siRNA的应用潜力将得到挖掘。

细胞表面受体与病毒之间的特异性相互作用决定了病毒感染的趋向性。硫酸乙酰肝素(HS)是一类线性硫酸化的异构多糖，在生理条件下携带大量的负电荷，通过弱相互作用识别并结合呈现正电荷特性的病毒蛋白，促进病毒粒子与特定入胞受体的结合。因此，HS是极具吸引力的病毒结合靶点，参与起始病毒与靶细胞的相互作用，在病毒感染方面具有重要作用。HS已被证明能够辅助包括严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)、1型单纯疱疹病毒(HSV-1)和口蹄疫病毒(FMDV)等多种病毒入胞，显著影响病毒的感染程度。硫酸乙酰肝素3-O-硫酸基转移酶(HS3ST)是HS生物合成的关键酶，其中HS3ST5的生物活性最强。HS3ST5修饰后的HS可结合HSV-1包膜糖蛋白gD，促进病毒入侵宿主细胞。因此，HS3ST5可作为潜在的抗病毒药物靶点。

已有的研究表明人工合成的siRNA能够引起多种细胞内的基因沉默现象，表明将合成的靶基因siRNA递送入细胞内能人为引起可控的基因干扰现象。然而目前还没有关于靶向干扰HS3ST5基因的siRNA的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种瞬时靶向干扰HS3ST5基因表达的siRNA，应用于拮抗FMDV等诸多利用HS作为受体的病毒感染，为开发新型广谱抗病毒药物提供参考。

本发明提供了一种瞬时靶向干扰HS3ST5基因表达的siRNA，所述siRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

本发明提供了一种靶向沉默HS3ST5基因的试剂盒，包括所述siRNA和转染试剂。

优选的，所述试剂盒还包括验证HS3ST5基因或HS3ST5蛋白表达的试剂。

优选的，所述验证HS3ST5基因表达的试剂包括RT-qPCR检测HS3ST5基因的引物和RT-qPCR检测试剂；

所述RT-qPCR检测HS3ST5基因引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的反向引物。

优选的，所述验证HS3ST5蛋白表达的试剂包括抗HS3ST5蛋白抗体。

本发明提供了一种靶向干扰HS3ST5基因表达的试剂在制备抗病毒感染的药物中的应用，所述试剂为所述siRNA。