[发明专利]超声引导下构建周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型的方法

说明书

本发明公开了一种超声引导下构建周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型的方法，涉及周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型技术领域，所述的方法，步骤如下：S1.VX2瘤块制备；S2.麻醉；S3.VX2瘤块植入：超声观察兔肺及胸膜回声，选择声窗良好的肋间隙，在超声实时引导下与脏层胸膜呈45°斜行进针至脏层胸膜下，然后改变进针角度至30°继续前进0.3‑0.5cm，注入肿瘤组织悬液，旋转穿刺针后快速退针，纱布压迫，超声观察进针位置有无出血、气胸；S4.观察：肿瘤组织悬液注射后7、10、14天超声观察肺部结节形成情况，并取肿瘤组织，进行HE染色、弹力纤维染色。本发明提供的方法可以精准、安全、高效的构建周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型，准确度高且可靠性好。

技术领域

本发明涉及周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型技术领域，具体涉及一种超声引导下构建周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型的方法。

背景技术

肺癌对胸膜的侵犯程度分为4类：PL0，肿瘤局限在脏层胸膜弹性纤维层下；PL1，肿瘤突破纤维层，但未达脏层胸膜全层；PL2，肿瘤突破脏层胸膜全层，尚未累及壁层胸膜；PL3，肿瘤累及壁层胸膜或胸壁组织，对其治疗方法的选择具有重要影响。相对于没有胸膜侵犯的肺癌，伴有PL3的肺癌，手术切除范围明显扩大；而伴有PL1/PL2的肺癌，手术完全切除后仍需要继续化疗。目前影像学技术对PL3类胸膜侵犯的术前诊断率已达90％以上，但无法对PL1/PL2类胸膜侵犯在术前做出精准诊断。因此，术前精准评估肺癌对脏层胸膜的侵犯程度(PL1/PL2)是亟需解决的临床问题。

动物实验是解决临床问题的有效途径，而目前尚无高效构建肺癌侵犯脏层胸膜动物模型的方法。CT引导下构建肺癌动物模型，肿瘤组织或细胞放置深度难以精准控制，生长至脏层胸膜侵犯需要较长的周期，且存在放射性。胸腔切开法虽然可以把肿瘤组织放置在胸膜下，但创伤大，并发症多，死亡率高。

超声是一种分辨率高、实时引导、操作简便的成像方式，在胸壁、胸膜及胸膜下结节穿刺活检中广泛应用，安全性高。

目前，还没一种在超声引导下精准、安全、高效的构建周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型的方法。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种超声引导下构建周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型的方法。能在超声引导下精准、安全、高效的构建周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型。

本发明的目的在于保护一种超声引导下构建周围型肺癌侵犯脏层胸膜动物模型的方法，步骤如下：

S1.VX2瘤块制备：复苏VX2肿瘤组织，复苏后进行剪切，得到VX2肿瘤组织块，注射至兔下肢肌层，进行培养，得到新鲜的肿瘤块，剔除坏死部分，留取鱼肉样、质韧的肿瘤组织，置于生理盐水溶液中剪切，制得肿瘤组织悬液，备用；

S2.麻醉：取新西兰兔，建立耳缘静脉通道，注射3％的戊巴比妥钠溶液，麻醉后，左侧卧位固定，将右侧胸部进行脱毛并消毒；

S3.VX2瘤块植入：超声观察兔肺及胸膜回声，选择声窗良好的肋间隙，在超声实时引导下与脏层胸膜呈45°斜行进针至脏层胸膜下，然后改变进针角度至30°继续前进0.3-0.5cm，注入肿瘤组织悬液，旋转穿刺针后快速退针，纱布压迫，超声观察进针位置有无出血、气胸；

S4.观察：肿瘤组织悬液注射后7、10、14天超声观察肺部结节形成情况，并取肿瘤组织，进行HE染色、弹力纤维染色。

优选地，步骤S1中，所述的复苏后进行剪切为剪切至1mm³；所述的置于生理盐水溶液中剪切为剪切至1mm³。

优选地，步骤S1中，所述的鱼肉样、质韧的肿瘤组织和生理盐水溶液的重量份数比为1：10。

优选地，步骤S1中，所述的注射为利用5ml注射器配18G针头注射。