[发明专利]一种从GST融合蛋白酶切后的产物中纯化无GST标签的目的蛋白的方法和产品在审
申请号: | 202211247249.3 | 申请日: | 2022-10-12 |
公开(公告)号: | CN115558015A | 公开(公告)日: | 2023-01-03 |
发明(设计)人: | 颜华;艾星芳 | 申请(专利权)人: | 生工生物工程(上海)股份有限公司 |
主分类号: | C07K1/14 | 分类号: | C07K1/14;C07K14/47 |
代理公司: | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人: | 郭莲梅 |
地址: | 201600 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 gst 融合 蛋白酶 产物 纯化 标签 目的 蛋白 方法 产品 | ||
1.试剂组合在制备用于从GST融合蛋白酶切后的产物中纯化无GST标签的目的蛋白的产品中的应用,其特征在于,所述试剂组合包括:抗GST抗体、抗凝血酶抗体以及用于偶联抗体的固相载体;所述抗GST抗体和所述抗凝血酶抗体的质量比为(10~150):1。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述抗GST抗体和所述抗凝血酶抗体的质量比为(30~100):1;
优选地,所述抗GST抗体和所述抗凝血酶抗体的质量比为(50~100):1。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述抗GST抗体和所述抗凝血酶抗体分别与固相载体偶联。
4.根据权利要求1或2所述的应用,所述抗GST抗体和所述抗凝血酶抗体独立地为抗体或其抗原结合片段;
优选地,所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体和重组抗体中的至少一种;
优选地,所述抗体的来源选自兔、大鼠、小鼠和山羊中的至少一种;
优选地,所述抗GST抗体包括小鼠抗GST单克隆抗体;
优选地,所述抗凝血酶抗体包括兔抗凝血酶多克隆抗体。
5.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述固相载体包括硝酸纤维素膜、尼龙膜、离子交换树脂、聚苯乙烯微孔板和磁珠中的至少一种;
优选地,所述固相载体包括磁珠;
优选地,所述磁珠包括纳米磁珠。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述纳米磁珠偶联抗GST抗体的抗体量为20~100μg/mg;
优选地,所述纳米磁珠偶联抗GST抗体的抗体量为30~100μg/mg;
优选地,所述纳米磁珠偶联抗GST抗体的抗体量为30~80μg/mg;
优选地,所述纳米磁珠偶联抗凝血酶抗体的抗体量为20~100μg/mg;
优选地,所述纳米磁珠偶联抗凝血酶抗体的抗体量为30~100μg/mg;
优选地,所述纳米磁珠偶联抗凝血酶抗体的抗体量为30~80μg/mg。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述纳米磁珠的粒径为200~2000nm;
优选地,所述纳米磁珠的粒径为500~1500nm;
优选地,所述纳米磁珠的粒径为800~1000nm;
优选地,所述纳米磁珠表面用于偶联抗体的活性基团包括羧基、氨基、和环氧基中的一种或几种;
优选地,所述纳米磁珠表面用于偶联抗体的活性基团包括羧基。
8.一种从GST融合蛋白酶切后的产物中纯化无GST标签的目的蛋白的产品,其特征在于,其包括如权利要求1~7任一项所述的试剂组合;
优选地,所述产品包括试剂和/或试剂盒。
9.一种从GST融合蛋白酶切后的产物中纯化无GST标签的目的蛋白的方法,其特征在于,其包括:将权利要求1~7任一项所述的试剂组合或权利要求8所述的产品与GST融合蛋白酶切后的产物混合。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,当固相载体为磁珠时,磁珠与GST融合蛋白酶切后的产物的混合比为(1mL或50mg):(500~2000)μg;
优选地,所述酶切是指凝血酶酶切;
优选地,所述混合比为(1mL或50mg):(800~1500)μg;
优选地,所述混合比为(1mL或50mg):(800~1200)μg;
优选地,混合时,磁珠上偶联的抗GST抗体与抗凝血酶抗体的质量比为(10~150):1;
优选地,混合时,磁珠上偶联的抗GST抗体与抗凝血酶抗体的质量比为(30~100):1;
优选地,混合时,磁珠上偶联的抗GST抗体与抗凝血酶抗体的质量比为(50~100):1;
优选地,所述混合的条件为:室温(5~25℃),1~4h。
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