[发明专利]一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用

说明书

本发明属于间质干细胞外泌体制备技术领域，且公开了一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，所述过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：步骤一：工作人员将准备5份过表达PTGDS细胞溶液。本发明通过设置5份不同浓度的聚乙二醇溶液，从而可以得出在不同浓度范围情况下的聚乙二醇溶液其自身对外泌体溶液后续提纯的影响，使得外泌体溶液在后续的制备提取过程中，有着更好的纯度，同时也在原有成本廉价的基础上也增强了外泌体溶液的浓度，并且工作人员也可以在最佳的聚乙二醇溶液浓度范围附近做出调整改变，从而可以更好的去确认更优质的外泌体提取浓度，这样将会给工作人员后续的作业使用带来了便利。

技术领域

本发明属于间质干细胞外泌体制备技术领域，具体为一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用。

背景技术

目前，在现有技术当中，工作人员在对过表达PTGDS基因的细胞溶液当中提取间质干细胞外泌体的时候，通常采用的差速离心法，该方法在实际使用的过程中，具有成本低廉的优点，但是该方法在对间质干细胞外泌体提取之后存在纯度不高且回收率不稳定的情况，从而导致了工作人员在后续的作业使用中容易产生间质干细胞外泌体不达标或者效果不够理想的情况，因此需要对其制备提取方式进行优化和改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，所述过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：

步骤一：

工作人员将准备5份过表达PTGDS细胞溶液，并且使得5份过表达PTGDS细胞溶液等量，然后分别对其进行初次过滤操作，从而去除5份过表达PTGDS细胞溶液当中的杂质，进而可以获得洁净的细胞溶液，随后将其放置于恒温箱当中，并且对其进行恒温保存；

步骤二：

工作人员准备亚微米过滤器，然后对其过滤部位进行清洁之后，并且同时工作人员可以将增压设备与亚微米过滤器的顶部连接，之后工作人员可以从培养箱当中取出5份过表达PTGDS细胞溶液，之后取出其中1份过表达PTGDS细胞溶液添加入至亚微米过滤器当中，并且开启增压设备，此时由于增压设备的运行，将会增强了亚微米过滤器的过滤结构上方压强，使得过表达PTGDS细胞溶液可以迅速的被过滤结构过滤处理，然后过滤几次从而可以得到去除细胞碎片的过表达PTGDS细胞溶液，之后剩余的4份过表达PTGDS细胞溶液同样按照上述步骤来操作；

步骤三：

然后，工作人员将多次过滤处理完毕的5份过表达PTGDS细胞溶液分别依次放入至超速离心机当中进行离心作业，控制在100000×g的速度运行，并且每组过表达PTGDS细胞溶液离心时间控制在20min，从而可以有效的消除掉过表达PTGDS细胞溶液当中的大囊泡并且使得外泌体沉淀下来，然后对其进行分化，从而分离清液和外泌体溶液，进而可以获取外泌体样品；

步骤四：

之后，工作人员分别将步骤三所得到的5份外泌体溶液，分别添加入不同浓度的聚乙二醇溶液，之后将其依次放入至离心机当中进行低速离心，并且控制温度在4摄氏度，然后可以得到5份离心沉淀液，之后分别将5组离心沉淀液当中的外泌体提取出来，并且对5份外泌体进行纯度检测，从而可以得到在不同浓度下其所提取出来的外泌体浓度，进而能够确认最佳聚乙二醇溶液的添加浓度；

步骤五：

工作人员检测出5份当中浓度最高的外泌体，从而可以知晓之前所添加的聚乙二醇溶液浓度，然后可以另外准备若干份步骤三的外泌体样品，并且在该聚乙二醇溶液浓度区间附近添加或减少以作调整，从而可以更加准确的确认该聚乙二醇溶液的浓度最佳范围，方便以后工作人员能够得到更高浓度的外泌体。