[发明专利]一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，其特征在于，所述过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：

步骤一：

工作人员将准备5份过表达PTGDS细胞溶液，并且使得5份过表达PTGDS细胞溶液等量，然后分别对其进行初次过滤操作，从而去除5份过表达PTGDS细胞溶液当中的杂质，进而可以获得洁净的细胞溶液，随后将其放置于恒温箱当中，并且对其进行恒温保存；

步骤二：

工作人员准备亚微米过滤器，然后对其过滤部位进行清洁之后，并且同时工作人员可以将增压设备与亚微米过滤器的顶部连接，之后工作人员可以从培养箱当中取出5份过表达PTGDS细胞溶液，之后取出其中1份过表达PTGDS细胞溶液添加入至亚微米过滤器当中，并且开启增压设备，此时由于增压设备的运行，将会增强了亚微米过滤器的过滤结构上方压强，使得过表达PTGDS细胞溶液可以迅速的被过滤结构过滤处理，然后过滤几次从而可以得到去除细胞碎片的过表达PTGDS细胞溶液，之后剩余的4份过表达PTGDS细胞溶液同样按照上述步骤来操作；

步骤三：

然后，工作人员将多次过滤处理完毕的5份过表达PTGDS细胞溶液分别依次放入至超速离心机当中进行离心作业，控制在100000×g的速度运行，并且每组过表达PTGDS细胞溶液离心时间控制在20min，从而可以有效的消除掉过表达PTGDS细胞溶液当中的大囊泡并且使得外泌体沉淀下来，然后对其进行分化，从而分离清液和外泌体溶液，进而可以获取外泌体样品；

步骤四：

之后，工作人员分别将步骤三所得到的5份外泌体溶液，分别添加入不同浓度的聚乙二醇溶液，之后将其依次放入至离心机当中进行低速离心，并且控制温度在4摄氏度，然后可以得到5份离心沉淀液，之后分别将5组离心沉淀液当中的外泌体提取出来，并且对5份外泌体进行纯度检测，从而可以得到在不同浓度下其所提取出来的外泌体浓度，进而能够确认最佳聚乙二醇溶液的添加浓度；

步骤五：

工作人员检测出5份当中浓度最高的外泌体，从而可以知晓之前所添加的聚乙二醇溶液浓度，然后可以另外准备若干份步骤三的外泌体样品，并且在该聚乙二醇溶液浓度区间附近添加或减少以作调整，从而可以更加准确的确认该聚乙二醇溶液的浓度最佳范围，方便以后工作人员能够得到更高浓度的外泌体。

2.根据权利要求1所述的一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，其特征在于：步骤一所述的5份过表达PTGDS细胞溶液为50ml，且进行初步的过滤次数为3次。

3.根据权利要求1所述的一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，其特征在于：步骤一所述的5份洁净过表达PTGDS细胞溶液在恒温箱当中的保存温度为5摄氏度，所述恒温箱的内部经过杀菌处理。

4.根据权利要求1所述的一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，其特征在于：步骤二所述过表达PTGDS细胞溶液的过滤次数为3次，且5份过表达PTGDS细胞溶液的过滤次数相同，每份所述过表达PTGDS细胞溶液在完成过滤后都需要清洁亚微米过滤器的过滤结构。

5.根据权利要求1所述的一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，其特征在于：步骤四所述的5份聚乙二醇溶液浓度分别为0.15-1.19g/mL、1.19-2.15g/mL、2.15-3.19g/mL、3.19-4.15g/mL和4.15g-5.19g/mL。

6.根据权利要求1所述的一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，其特征在于：步骤四所述的外泌体溶液在离心的时候控制时间在10min，所述离心机的低速离心为5000×g。

7.根据权利要求1所述的一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，其特征在于：步骤五所述的聚乙二醇溶液浓度调整数值为0.1g/ml-0.5g/ml，且工作人员可以准备3-5份外泌体样品来确认聚乙二醇溶液浓度的最佳添加区间。

8.根据权利要求1所述的一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，其特征在于：步骤二所述的去除细胞碎片的过表达PTGDS细胞溶液其5份需要保持毫升一致。