[发明专利]用于追踪全同胞家系豹纹鳃棘鲈放流群体的SSR标记、其扩增引物及应用

说明书

本发明提供了一种用于追踪全同胞家系豹纹鳃棘鲈放流群体的SSR标记，所述SSR标记包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的PLHB‑01、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的PLHB‑02、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的PLHB‑03、核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的PLHB‑04、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的PLHB‑05、核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的PLHB‑06、核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的PLHB‑07、核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的PLHB‑08。本发明还提供了所述SSR标记的扩增引物、用途、以及用于追踪全同胞家系豹纹鳃棘鲈放流群体的方法。本发明开发的SSR分子标记可用于人工放流豹纹鳃棘鲈鉴定，在豹纹鳃棘鲈人工增殖放流广泛应用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种用于追踪全同胞家系豹纹鳃棘鲈放流群体的SSR标记、其扩增引物及应用。

背景技术

豹纹鳃棘鲈(Plectropomus Leopardus)，隶属鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Perciformes)、鮨科(Serranidae)、鳃棘鲈属(Plectropomus)，属暖水性岛礁海水鱼，主要分布于西太平洋至印度洋海域，是我国南方重要的养殖鱼类。豹纹鳃棘鲈肉质鲜嫩、味道鲜美，具有低脂肪、低胆固醇和高蛋白等特点，属高档食用鱼类，深受广大消费者喜爱，市场前景广阔。然而，豹纹鳃棘鲈自然数量稀少，近些年来高强度的捕捞压力已经使其资源处于枯竭状态。为解决我国天然海域豹纹鳃棘鲈生物量急剧下降的问题，通常将人工增殖培育的豹纹鳃棘鲈幼苗投放到放流海域，以恢复或增加天然种群数量。

人工增殖放流的鱼苗，到了天然水域不一定能适应存活。回捕率是指放流的水生动物，经过一定时间后回捕的个体数与总放流个体数之比的百分率。对增殖放流鱼苗回捕率的计算，关键在于要从回捕群体中鉴别出放流群体，进而才能分析放流群体在自然环境中的存活和扩散状况，以及对当地野生种群的影响。常用鉴别放流群体的标记包括挂牌、剪鳍、烙印和荧光色素等，存在标记保有率低、影响标记鱼类的行为和生长等缺点。

DNA分子标记是一种新型的标记技术，检测的是DNA水平上的遗传差异，不仅克服了上述标记缺点，而且多态性高，群体鉴别更加高效。SSR(Simple Sequence Repeats)标记是近年来发展起来的一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术，也称为微卫星DNA(Microsatellite DNA)，是一类由几个核苷酸(一般为1～6个)为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列。微卫星在染色体上呈随机分布，其多态性是由重复次数不同及重复程度的不完全造成，从而产生了高水平的等位基因多态性。

豹纹鳃棘鲈人工增殖放流鱼苗一般采用人工授精方法，父母亲本明确。同一批放流鱼苗一般为全同胞家系，遗传背景清晰，每个SSR位点最多只有4个等位基因。通过SSR标记分子标记技术进行分析，可以准确、简单、快捷地将放流鱼苗鉴别出来。

发明内容

本发明的目的在于针对以上要解决的技术问题，提供一种用于追踪全同胞家系豹纹鳃棘鲈放流群体的SSR标记，该标记可以有效鉴别区分在野外回捕的豹纹鳃棘鲈是否为人工放流群体。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于追踪全同胞家系豹纹鳃棘鲈放流群体的SSR标记，所述SSR标记包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的PLHB-01、核苷酸序列如SEQID NO.2所示的PLHB-02、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的PLHB-03、核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示的PLHB-04、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的PLHB-05、核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示的PLHB-06、核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的PLHB-07、核苷酸序列如SEQ IDNO.8所示的PLHB-08。

另一方面，本发明还提供了一种用于追踪全同胞家系豹纹鳃棘鲈放流群体的SSR标记的扩增引物，所述扩增引物包括：