[发明专利]一种抗BCMA的纳米抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗BCMA的纳米抗体及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明利用CRISPR/Cas9技术敲除T细胞中B2M和TRAC基因制备获得通用型CAR‑T细胞；将靶向BCMA的纳米抗体和CD47的天然配体SIRPα胞外N端V区、CD28跨膜区、4‑1BB胞内信号区和CD3ζ胞内信号区串联构建成一种双靶向嵌合抗原受体，用于多发性骨髓瘤的治疗，以解决CAR‑T细胞疗法在治疗多发性骨髓瘤中面临的高复发问题。本发明制备的通用型CAR‑T细胞对多发性骨髓瘤细胞具有较强的杀伤活性，有效的改善了治疗效果，并为后续开发具有高效、持久抗肿瘤活性的过继性免疫疗法提供一种关键材料。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种抗BCMA的纳米抗体及其制备方法和应用。

背景技术

多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是一种以浆细胞(plasma cells，PCs)异常增殖，同时导致体内产生大量病理性免疫球蛋白为特征的血液肿瘤性疾病，其肿瘤细胞起源于骨髓中的浆细胞。在血液肿瘤中MM的发病率仅次于淋巴瘤，约占血液系统恶性肿瘤的10％，发病率约为2～3/10万人。在免疫治疗领域，研究表明CD38、CD47、CD138、SLAMF7、GPRC5D、FcRH5和BCMA等在恶性浆细胞表面高度表达，其单克隆抗体或抗体偶联药物表现出良好的抗肿瘤作用。尽管如此，由于MM较高的克隆异质性且与骨髓环境具有复杂的相互作用，MM患者经过标准化治疗后仍会产生耐药性，从而最终导致大多数患者的复发。因此，为了改善治疗过程中疗效降低等问题需要开发出更加安全、有效、多样的新药物。

BCMA(B-cell maturation antigen；CD269；TNFRSF17)属于肿瘤坏死因子受体超家族成员。在正常人体组织中，BCMA的mRNA和蛋白几乎只发现在浆细胞上，并且在浆细胞恶性转化过程中选择性地过度表达，促进肿瘤细胞生长、存活和耐药性的发生。无论是细胞系还是患者样本，BCMA在MM细胞表面的一致性上调和唯一性，使得BCMA成为MM药物发现和开发的一个引人注目的靶标。此外，研究发现BCMA在多发性骨髓瘤的不同阶段(从未治疗到复发)的表达水平相似，这表明BCMA可能是在整个疾病过程中均有效的治疗靶点。

CD47是一种在多种正常组织细胞上广泛表达的跨膜糖蛋白，此外在多种肿瘤细胞上也过度表达(骨肉瘤、结直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌和头颈癌等)，是一种重要的肿瘤抗原。CD47属于免疫球蛋白超家族，与多种蛋白质结合，包括整合素、血小板反应蛋白-1和信号调节蛋白α(SIRPα)。与参与调节肿瘤细胞吞噬作用清除逃逸的检查点PD-1/PD-L1轴、MHC-I/LILRB1轴类似，CD47-SIRPα轴也具有作为免疫检查点逃逸吞噬细胞清除的功能。CD47通过与免疫细胞上SIRPα的N末端结合，发出“别吃我”信号，抑制巨噬细胞的吞噬作用，从而保护健康细胞不被免疫系统破坏。而在肿瘤的天然免疫中，肿瘤细胞也利用这一机制：通过在肿瘤细胞表面过表达CD47分子，使巨噬细胞把其当作“正常细胞”，从而逃避巨噬细胞介导的吞噬作用。研究发现阻断CD47-SIRPα相互作用可促进吞噬细胞(包括巨噬细胞和中性粒细胞)对肿瘤细胞的破坏，从而增强抗肿瘤作用。近期研究发现，与非恶性浆细胞相比，多发性骨髓瘤(MM)细胞通过广泛上调CD47并利用上述机制从而逃逸吞噬细胞的清除，利用抗CD47的单克隆抗体阻断CD47与SIRPα的相互作用后发现吞噬细胞吞噬能力增强并抑制MM细胞的生长。因此，CD47在MM上高表达的特点使其可能成为开发治疗MM药物的重要靶点。