[发明专利]一种CD16抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种抗人CD16的抗体，由轻链和重链组成，所述的轻链和重链为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，同时提供了编码上述抗体的核酸分子、含有上述核酸的载体、上述载体转化的宿主细胞及其应用。本发明还提供了一种使用荧光染料标记该抗体的方法，同时公布了一种检测前述荧光染料标记抗体的方法。本发明提供的抗体为高表达序列，表达量高且杂质少，易纯化收集得到，降低纯化收集成本，有利于大规模生产及应用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种CD16抗体及其制备方法和应用。

背景技术

CD16(Cluster of differenciation antigen-16)也称“FcγRIII”，为分子量50000-70000的糖蛋白，是Fc受体家族的一员。最初作为在机体先天性免疫系统(自然杀伤细胞、单核细胞和巨噬细胞等)表达的白细胞分化抗原分子，以单核巨噬细胞的一种分化标志提出。CD16结合抗体免疫球蛋白Fc部分，进而激活NK细胞，促进免疫系统的保护功能。FcγRIII有FcγRⅢA和FcγRⅢB两种异型，为穿膜结构，主要分布于巨噬细胞、NK细胞和嗜酸性粒细胞等免疫细胞，巨噬细胞表达高水平FcγRⅢA，而单核细胞表达水平较低。FcγRⅢA与二硫键连接的CD3ζ或FcεRⅠγ链双体相关，巨噬细胞上FcγRⅢA与CD3复合体γ链相关，NK/LGL上FcγRⅢA则与ζ链相关。TGF-β促进培养的单核细胞表达FcγRⅢA。FcγRⅢB，通过GPI“锚”在中性粒细胞表面，每个人中性粒细胞表达10万～20万血液中可溶性的FcγRⅢ主要来自这种形式，中性粒细胞激活剂短时间处理后可明显降低FcγRⅢB的表达水平，可能与通过激活内源性蛋白酶切除GPI连接分子有关。

CD16是淋巴系统中与单核细胞和自然杀伤(NK)细胞相关的生物标记物。免疫组化检测CD16可用于从诸如粘膜和皮肤γ-δT细胞淋巴瘤等外周T细胞淋巴瘤中鉴别诊断肝脾的γ-δT细胞淋巴瘤和γ-δT细胞大颗粒淋巴细胞白血病。据报道，约58％的肝脾的γ-δT细胞淋巴瘤和86％的γ-δT细胞大颗粒淋巴细胞白血病CD16有表达，而皮肤和粘膜γ-δT细胞淋巴瘤不表达CD16。该抗体也能用于NK细胞在自身免疫、肿瘤和感染性疾病的相关研究。

中国发明专利CN201611041756.6公开了能特异性结合CD16的全人源单域抗体及其抗原结合片段。此单域抗体是由存在于抗体重链基因可变区中的互补决定区(CDR)特异性基因序列决定的，并在原核和真核细胞中获得有效表达的特异性结合CD16的抗体。利用此抗体CDR区或部分或全基因，可在原核和真核细胞及任何表达系统中改造和生产不同形式的基因工程抗体，可用于制备在临床上诊断或治疗相关疾病的制剂。

传统的科研，诊断检测抗体都是通过动物杂交瘤的方式制备，在制备这些抗体时，由于杂交瘤不稳定，抗体基因容易丢失。此外，传统的杂交瘤制备技术不会对目标抗体的基因序列及蛋白序列进行鉴定，不利于对目标抗体后续的生产，制备及研发工作。

本发明经过逆向技术以及蛋白测序，获得了一种序列结果明确CD16抗体，蛋白测序后设计DNA序列，通过构建CHO细胞重组表达该抗体。本发明首次公布了所述序列的抗人CD16抗体的蛋白序列，对该蛋白序列一致的抗体及相关衍生抗体请求保护。

此外，本发明还公布了前述稳转CHO细胞株所产抗人CD16抗体，命名克隆号为HCD16-02(通俗命名Rec.3G8)及使用荧光染料标记该抗体的方法，同时公布了一种使用流式细胞仪检测前述荧光染料标记抗体的方法。/

发明内容

本发明的术语和声明：

1、如本文所用，冠词一个、一种和所述：除非以其它方式明确地限定到一个(种)对象，否则包括复数的对象。