[发明专利]用于诊断全结肠无神经节细胞症的生物标志物

说明书

本发明涉及生物医学技术领域，公开了一种用于诊断全结肠无神经节细胞症（TCA）的生物标志物，所述生物标志物包括miR‑34a‑5p。本发明首次发现某些特定microRNA种类，例如miR‑106b‑5p、miR‑205‑5p、miR‑375‑3p和miR‑34a‑5p，在先天性巨结肠（HSCR）血浆外泌体中选择性富集，其中miR‑34a‑5p在TCA患者的血浆外泌体中显着升高。研究结果显示HSCR患儿循环外泌体microRNA谱可用作TCA辅助诊断工具。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种用于辅助诊断全结肠无神经节细胞症的外周血生物标志物。

背景技术

先天性巨结肠 (HSCR) 是一种由于肠道末端神经节细胞缺乏引起的疾病，它会导致排便延迟，如果不治疗，对新生儿而言是致命的。 HSCR的全球发病频率约为1/5000，其中男性占4:1。HSCR根据神经节组织缺失的长度分为三类：短段（S-HSCR；80%发病率）、长段（L-HSCR；15%发病率）和全结肠无神经节细胞症（TCA；3-7 %发病率）。 TCA 是一种罕见的HSCR形式，被定义为从肛门延伸到回盲瓣近端至少 50 厘米的神经节细胞缺失。尽管它与其他形式的 HSCR 在神经节缺失方面具有相同的特征，但仍存在一些尚未解释的差异。

无神经节细胞的肠管长度并不总是与 HSCR 症状密切相关，许多临床方面仍然令人费解，诊断和治疗仍然困难。婴儿期远端结肠缺失神经节细胞的病理特征主要通过直肠粘膜活检来确诊。然而，许多因素会影响直肠粘膜活检，并且存在出血、肠穿孔和感染等并发症的危险。对比灌肠和肛门直肠测压被推荐来帮助诊断HSCR，但由于假阳性率高，不能用来排除 HSCR。因此，为 HSCR 开发合适的非侵入性诊断方法仍然是一个挑战。

外泌体是源自体内的直径为 30-100 nm 的膜界胞外囊泡。几乎所有细胞类型都可以在正常和压力条件下分泌外泌体。此外，外泌体被发现携带各种核酸，如 mRNAs 和非编码 RNA，在细胞间信号转导、免疫调节和肿瘤发生中起关键作用。目前，外泌体越来越多地被评估为各种疾病的诊断和预后生物标志物。并且来自血浆的外泌体内容物，例如长链非编码 RNA (lncRNA) 和 microRNA，已被证明在 HSCR 中失调。

发明内容

为了应对现有技术中不足，本发明提供了一种用于辅助诊断全结肠无神经节细胞症的外周血生物标志物，支持循环外泌体 microRNA 谱，可用作 TCA 辅助诊断工具。

本发明的技术方案是：

一种用于辅助诊断全结肠无神经节细胞症的外周血生物标志物，其特征是，所述生物标志物包括miR-34a-5p基因。

进一步，所述生物标志物还包括miR-106b-5p、miR-205-5p、miR-375-3p基因中的一种或多种。

进一步，所述标志物基因从 TCA患儿外周血血浆外泌体中提取得到。

本发明的优点在于：

四种DEM（miR-106b-5p、miR-205-5p、miR-375-3p和miR-34a-5p）在血浆外泌体中的表达存在差异。通过qRT-PCR测定，miR-34a-5p在TCA中较其他类型HSCR大量表达，可以将microRNA (miR-34a-5p) 及其相关基因用作TCA的外周血浆生物标志物。

具体实施方式

本专利通过microRNA测序表征 HSCR 患者血浆来源外泌体中的 microRNA 含量，并利用三个常见数据库预测靶基因。通过 KEGG 通路和相互作用网络分析对microRNA和相关基因进行研究。由于TCA与其他形式的HSCR不同的独特性质，随后也将比较HSCR和TCA之间的差异表达microRNA(DEM)以确定TCA特异性改变的 microRNA。这项研究的结果进一步支持血浆来源外泌体中 microRNA 可以作为TCA的生物标志物的观点。

具体方法包括如下步骤：