[发明专利]一种溶杆菌来源的嗜铁素及其制备方法

说明书

本发明公开了一种溶杆菌来源的嗜铁素及其制备方法。经发酵培养、XAD16树脂吸附解吸、HPLC制备等从产酶溶杆菌OH11发酵液中获得了高纯度的嗜铁素，经过质谱、核磁确定了该嗜铁素为儿茶酚型，由2个儿茶酚基团和1个亚精胺组成，分子式为C₂₁O₆N₃H₂₇，分子量为417Da，命名为Sperbactin。此外，本发明还公布了高产嗜铁素的发酵培养基和发酵条件，此时嗜铁素产量可达到213.99mg/L，为工业化生产奠定了基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种溶杆菌来源的嗜铁素及其制备方法与应用

背景

溶杆菌属于黄单胞科(Xanthomonadaceae)，溶杆菌属(Lysobacter)，是一类重要的，尚未完全开发的重要植物病害生防细菌，广泛存在于土壤和淡水环境中。截止2019年，国际上报道的溶杆菌属细菌已达到50个种，其中产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)是溶杆菌属的一个典型种，也是目前作为生防细菌研究较多的一种溶杆菌。该菌能产生丰富的胞外水解酶和小分子抗菌活性产物，对农作物重要病原真菌、卵菌、细菌以及线虫具有显著的拮抗作用。。

嗜铁素(siderophore，也叫铁载体)主要是细菌、真菌在铁缺乏环境中自身合成并分泌到胞外的次生代谢产物，其本质为非蛋白质氨基酸，相对分子质量小于10KDa。对三价铁有较强的亲和力，通过降低环境pH值来增加铁的溶解性。迄今为止，还没有关于溶杆菌产生嗜铁素的报道。因此，从溶杆菌中分离鉴定嗜铁素，丰富了溶杆菌活性产物的种类和功能，有助于解析溶杆菌的作用机制，而且还能为开发新的生防制剂提供物质基础。

发明内容

本发明目的在于提供一种溶杆菌来源的嗜铁素及其制备方法与应用。

为实现上述目标，本发明所采用的技术方案为：

第一方面，本发明提供了一种从产酶溶杆菌OH11发酵液中分离纯化的嗜铁素，进一步，鉴定了嗜铁素的化学结构如下：

本发明所述的嗜铁素类型为儿茶酚型，分子量为417Da，由2个儿茶酚基团和1个亚精胺组成，命名为Sperbactin。

第二方面，本发明还提供了第一方面所述的嗜铁素的制备方法，包括以下步骤：(1)制备产酶溶杆菌OH11的发酵液；(2)制备嗜铁素解吸液；(3)嗜铁素的分离纯化。

本发明所述的产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)OH11是本实验室自主分离的一个菌株，于2007年3月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.1978(见专利ZL200710190998.6)。

在一些实施例中，本发明步骤(1)是将产酶溶杆菌OH11接种于发酵培养基中进行发酵，在一些具体的实例中发酵过程为：将活化的菌株OH11接入到LB液体培养基中26～28℃、170～190rpm培养12-15h，按照1.0-2.5％接种量转入发酵培养基中，26-29℃、150-200rpm培养48-60h。