[发明专利]一种基于受体结合检测新冠病毒的方法

说明书

本发明公开了一种基于受体结合检测新冠病毒的方法，属于病毒检测领域。该方法包括以交联琼脂糖为基质，通过羧基表面修饰后得到琼脂糖磁性微球，与受体蛋白以共价偶联方式结合形成受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球，其表面共价结合的受体蛋白识别新冠病毒样本外膜S蛋白的受体结合区域，两者相互结合模拟新冠病毒与宿主细胞的结合过程捕获新冠病毒，依次经过磁性微球清洗、纯化和洗脱得到具备细胞结合能力的新冠病毒，通过免疫结合‑荧光定量PCR联合检测并评估其感染活性和传播能力，适用于评价新冠病毒感染者治疗过程中病毒复制和传播情况，以及治愈患者出现复阳症状时体内携带新冠病毒的传染性，具有重要实用价值。

技术领域

本发明属于新冠病毒检测领域，尤其涉及一种基于受体结合检测新冠病毒的方法。

背景技术

新冠病毒(COVID-19)是造成全球新冠疫情的病原体，是世界各国共同面临的严重公共卫生问题。新冠病毒的检测方法分为病毒基因定量PCR检测(病毒核酸检测)和病毒抗原检测，前者为当前公认的检测金标准，但新冠病毒核酸检测只能定性是否发生新冠病毒感染，不能提示该患者是否具有传播性，尤其对于新冠病毒感染恢复后发生复阳的患者群体(即出院后的患者再次出现新冠病毒阳性)，因这部分患者体内可能存在抗病毒的中和抗体，传统的定量PCR检测能发现其体内病毒，但无法判断病毒是否具备感染活性和传播能力。

发明内容

针对现有技术中的上述问题，本发明的目的是提供一种基于受体结合检测新冠病毒的方法，通过磁性微球与新冠病毒以配受体方式结合，模拟新冠病毒吸附在宿主细胞的病毒学行为及过程，然后定量PCR检测新冠病毒量，判断患者体内病毒是否具备受体结合能力，从而推断患者体内新冠病毒的感染活性和传播能力。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种基于受体结合检测新冠病毒的方法，包括以下步骤：

(1)制备受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球：以交联琼脂糖为基质，通过羧基 (-COOH)表面修饰后得到琼脂糖磁性微球，与受体蛋白以共价偶联方式结合，形成受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球；

(2)受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球捕获新冠病毒：所述受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球表面共价结合的受体蛋白识别新冠病毒样本外膜S蛋白的受体结合区域(RBD)，两者相互结合模拟新冠病毒与宿主细胞的结合过程捕获新冠病毒；

(3)受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球捕获新冠病毒后，依次经过磁性微球清洗、纯化和洗脱，得到具备细胞结合能力的新冠病毒；

(4)通过免疫结合-荧光定量PCR联合检测上述具备受体结合能力的新冠病毒，评估其感染活性和传播能力。

作为优选，所述受体蛋白选自肝素蛋白(Heparin)或血管紧张素转化酶2 (ACE2)重组蛋白。

作为优选，所述受体蛋白为来源于猪小肠粘膜的肝素蛋白。

作为更优选，所述基于受体结合检测新冠病毒的方法包括：

(a)制备肝素化磁性微球：以交联琼脂糖为基质，通过羧基表面修饰后得到琼脂糖磁性微球，与肝素蛋白以共价偶联方式结合，形成肝素化磁性微球；

(b)肝素化磁性微球捕获新冠病毒：所述肝素化磁性微球表面共价结合的肝素识别新冠病毒样本外膜S蛋白RBD区域，两者相互结合模拟新冠病毒与宿主细胞的结合过程捕获新冠病毒；

(c)所述肝素化磁性微球捕获新冠病毒后，依次经过磁性微球清洗、纯化和洗脱，得到具备细胞结合能力的新冠病毒；

(d)通过免疫结合-荧光定量PCR联合检测上述具备受体结合能力的新冠病毒，并评估其感染活性和传播能力。

作为优选，所述新冠病毒样本来源于新冠病毒感染者或新冠病毒感染治愈后复阳患者的体外组织或血液。