[发明专利]一种降解组测序的建库试剂盒、方法和应用

权利要求书

1.一种降解组测序的建库试剂盒，其特征在于，包括5p接头序列和mi-RTP，其中，所述5p接头序列和mi-RTP分别具有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的建库试剂盒，其特征在于，还包括逆转录试剂和/或PCR试剂。

3.根据权利要求2所述的建库试剂盒，其特征在于，所述PCR试剂包括PCR引物，PCR上游引物具有SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，PCR下游引物具有SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求1-3任一所述的建库试剂盒，其特征在于，还包括纯化试剂。

5.根据权利要求1-3任一所述的建库试剂盒，其特征在于，还包括mRNA提取试剂。

6.一种利用权利要求1所述的建库试剂盒进行建库的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，获得mRNA样本，添加所述5'接头；

S2，利用mi-RTP对添加所述5'接头后的RNA进行逆转录，获得cDNA样本；

S3，以步骤S2获得的cDNA样本为模板进行PCR扩增；

S4，对PCR扩增产物进行纯化，得到文库。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤S3中，PCR上游引物具有SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，PCR下游引物具有SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤S3中，PCR扩增的体系为：HotStart Flex 2×Master Mix 13μL；PCR上游引物1μL；PCR下游引物1μL；cDNA 10μL。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤S3中，PCR扩增的程序为：98℃30sec；98℃10sec，60℃30sec，72℃，15sec，15循环；72℃10min；4℃∞。