[发明专利]一种促进NK细胞分化的iPS细胞系及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种促进NK细胞分化的方法，其特征在于，利用基因编辑技术在人类iPS细胞CD45基因座的3’UTR区敲入促进NK细胞分化的组合基因；所述组合基因包括膜结合型超级白细胞介素15；所述膜结合型超级白细胞介素15包括CD8A信号肽、膜结合型IL15、CD8A的铰链区和跨膜区；所述膜结合型超级白细胞介素15与CD45基因之间通过P2A连接；所述膜结合型IL15为含有N72D突变的增强型IL15片段。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述敲入为对CD45基因座的特定DNA序列进行剪切，产生DNA缺口，iPS细胞启动同源和非同源基因重组DNA修复过程；所述基因编辑技术包括但不限于CRISPR-CAS技术、TALEN技术和ZFN技术。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述重组DNA修复过程的同源臂序列来源于CD45终止密码子“TAG”前700nt和后700nt的DNA序列。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜结合型超级IL15编码序列mbIL15s的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的CRISPR-CAS技术包括靶向人类CD45基因特定位置的短核苷酸序列；所述短核苷酸序列如SEQ ID NO:5~SEQ ID NO:12任意一条序列所示。

6.一种细胞或其群体，其特征在于，采用权利要求1~5任一项所述的方法制备得到；所述细胞包括诱导性多能细胞或由其衍生NK细胞，并且与所述细胞的从外周血、脐带血或任何其它供体组织中获得的天然对应细胞相比具有以下（a）~（b）中的至少一种特性：

（a）降低iPSC分化制备免疫细胞过程中外源IL15的添加量；

（b）提高分化得到的免疫细胞的持久性和/或存活率。

7.权利要求6所述的细胞或其群体在制备NK细胞中的应用。