[发明专利]NK细胞与CD20、CD38、Her2抗体联合应用

说明书

本发明涉及抗体和细胞治疗领域，具体为肿瘤治疗中HER2抗体与NK细胞的联合应用。所述NK细胞是通过以下步骤制备得到的：1)制备单个核细胞；2)使用CD137、CD28、CD3预处理细胞培养容器；3)将1)接种于2)中，使用含IL‑2、IL‑15、IL‑12、CD137和血浆的培养基进行细胞培养；4)补充含有血浆、IL‑2、IL‑15、IL‑12的培养基；5)补充含有IL‑2、IL‑15、IL‑21的培养基。

技术领域

本发明属于抗体和细胞治疗领域，具体涉及NK细胞与CD20、CD38、Her2抗体联合应用。

背景技术

自然杀伤(Natural killer，NK)细胞来源于骨髓淋巴样干细胞，其细胞胞体大、胞浆量多、电镜下观察胞内含有致密颗粒，故又称为大颗粒淋巴细胞。人类NK细胞约占外周血淋巴细胞的10％-15％，其表面标志为特异性表达CD56，而缺乏CD3表达。NK细胞是机体先天性免疫系统的重要组成部分，作为宿主免疫第一道防线，自然杀伤细胞无需预先致敏就可以对肿瘤和病毒感染的靶细胞产生快速应答，在机体免疫早期发挥重要的监视作用。不同于传统T细胞，NK细胞无需通过基因重排识别抗原，它发挥功能的物质基础是表达在其表面的一系列受体，通过活化性受体和抑制性受体之间的动态平衡触发自身活性，从而启动杀伤靶细胞的过程。NK细胞活化后能与靶细胞之间形成突触，释放穿孔素和颗粒酶裂解靶细胞，还可通过Fas(CD95)和FasL(CD95L)的相互作用、TNF和TNF受体的结合、IFNγ的分泌等促进对靶细胞的杀伤。此外，NK细胞还可以通过分泌效应细胞因子，影响机体适应性免疫应答功能。

NK细胞与靶细胞相互作用的结果由NK细胞抑制性信号与活化性信号之间的平衡来决定。NK细胞活化性受体识别包括多种细胞因子受体、整合素、杀伤受体、识别某些诱导表达分子的受体等；NK细胞抑制性受体包括多种识别MHCⅠ类分子的特异性受体。正常情况下，NK细胞抑制性受体识别靶细胞表面自身MHCⅠ类分子，传导抑制性信号，抑制NK细胞对靶细胞的攻击，而在病理状态下，靶细胞表面MHCⅠ类分子下调，抑制性信号减弱，NK细胞活化，对靶细胞发动攻击。

NK细胞是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性效应(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)的主要效应细胞。单克隆抗体一方面与靶细胞上的抗原结合，另一方面单抗的Fc段可与NK细胞表面的FcγRⅢa结合，通过抗体的介导，不仅拉近了NK细胞与靶细胞的距离，而且激活了NK细胞，NK细胞活化后分泌颗粒酶、穿孔素等对靶细胞直接杀伤，同时分泌IFN-γ促进DC细胞的抗原提呈作用。

CD20(Cluster of Differentiation 20)是一种跨膜蛋白，是一种33-37kDa的非糖基化蛋白，表达于除浆细胞外的发育分化各阶段的B细胞的表面，通过调节跨膜钙离子流动直接对B细胞起作用，在B细胞增殖和分化中起重要的调节作用。除在正常B细胞中表达外，CD20还在B细胞来源的淋巴瘤、白血病等的肿瘤细胞表达，以及涉及免疫疾病和炎症疾病的B细胞中表达，所以CD20抗原成为淋巴癌、白血病和某些自体免疫等疾病治疗的目标靶点。

抗CD20单克隆抗体常用来治疗B细胞淋巴瘤，其抗肿瘤作用与三种作用机制有关，即抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体与CD20分子结合引起的直接效应，包括抑制细胞生长、改变细胞周期和细胞凋亡。自1997年全球首款抗CD20单抗——罗氏的利妥昔单抗获批以来，全球已经批准多款抗CD20单抗。根据人源化程度以及Fc片段修饰，抗CD20单抗可分为三代，其中第一代是以利妥昔单抗为代表的嵌合或者鼠源单抗，第二代是以奥法木单抗为代表的人源化单抗，第三代的抗CD20单抗以奥妥珠单抗为代表，其抗体的Fc片段经过了糖基化修饰。