[发明专利]一种脉冲式热刺激诱导方式

说明书

本发明公开了一种脉冲式热刺激诱导方式，包括以下步骤：步骤A1、将基因工程菌株sHG13‑s接种至LB液体培养基中，培养，当发酵培养液的细胞光密度OD600为0.4~1.3时，开始脉冲式热刺激诱导；步骤A2、向发酵培养液中加入热的LB液体培养基，使发酵培养液瞬间达到目标温度为T_t，在诱导周期内进行n次热刺激诱导，每次热刺激诱导的间隔为10~15min。本发明与传统热刺激诱导方式相比，仅需提供诱导的瞬时温度，能够减少能量供应成本；诱导时间缩短，节约时间成本。

技术领域

本发明涉及一种脉冲式热刺激诱导方式，属于微生物发酵技术领域。

背景技术

大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、培养周期短、转化效率高、表达水平高、容易操作等特点，是发展最早、应用最广泛、最容易操作的高效表达系统。而基因表达系统的强弱在于诱导调控方式的高效程度，目前调控类型的表达载体主要包括糖原调控型、温度调控型、色氨酸调控型、磷酸盐调控型、pH调控型、溶氧调控型、生物素调控型、光调控型等。糖原调控型是现阶段最广泛的调控方式，通过lac/tac表达系统采用化学诱导剂解除阻遏蛋白抑制表达出目的蛋白，但最有效的化学诱导剂异丙基硫代-β-半乳糖苷（IPTG）价格昂贵且具有细菌毒性，不具备工业价值。而温度调控诱导方式避免了使用特殊的介质、昂贵的化学诱导剂，克服了其他表达系统的缺点，目前已经成功应用到药用重组蛋白的生产中。中国专利200410065776.8公开了“预热-注入法”可以实现大体积发酵液的快速升温，但在诱导过程中需一直维持诱导温度直至诱导结束，诱导时间较长，持续的能量需要大量的能量供应，较长的诱导周期耗费大量的时间成本，基于此，本发明公开了一种脉冲式热刺激诱导方式。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种脉冲式热刺激诱导方式，与传统热刺激诱导方式相比，仅需提供诱导的瞬时温度，能够减少能量供应成本；诱导时间缩短，节约时间成本。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种脉冲式热刺激诱导方式，具体方法包括以下步骤：

步骤A1、将基因工程菌株sHG13-s接种至LB液体培养基中，培养，当发酵培养液的细胞光密度OD600为0.4~1.3时，开始脉冲式热刺激诱导；

步骤A2、向发酵培养液中加入热的LB液体培养基，使发酵培养液瞬间达到目标温度为T_t，在诱导周期内进行n次热刺激诱导，每次热刺激诱导的间隔为10~15min；

每次热刺激诱导时，先确定测定发酵培养液的温度T_n、体积V_n，再以纯水代表发酵培养液、热水代表热的LB液体培养基，以确定每次加入热的LB液体培养基的体积V_xn，热的LB液体培养基与热水的温度相同且大于T_t；

其中，n表示脉冲式热刺激的诱导周期内的脉冲频率，T_n表示第n次热刺激前发酵培养液的温度，V_n表示第n次热刺激前发酵培养液的体积，V_xn表示第n次热刺激加入的100℃的LB液体培养基体积；LB液体培养基配方：每升中，蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g，其余为纯水，pH 7.0；

基因工程菌株sHG13-s是以大肠杆菌为起始菌株，先敲除阻遏基因再敲入标签基因培养，再导入连接目的基因的线性化温敏型表达载体构建得到。

其中，上述目标温度T_t为40~45℃。

其中，上述n为1~11次。

其中，上述诱导周期为1~2h。