[发明专利]一种用于鉴别湖北麦冬的试剂盒和方法

说明书

本发明涉及包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示引物对的用于鉴别湖北麦冬的试剂盒，还涉及鉴别湖北麦冬的方法。本发明试剂盒及方法大大提高了鉴别的准确性，有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种用于鉴别湖北麦冬的试剂盒和方法。

背景技术

麦冬根据产地不同分为浙麦冬和川麦冬，前者主产于浙江的慈溪、余姚、萧山等地，后者主产于四川的绵阳地区；湖北麦冬属于山麦冬中的其中一个品种，主产于湖北。麦冬作为常用大宗药材，在市场上流通量较大，近年来随着浙麦冬栽培面积的减少，川麦冬和湖北麦冬已成为市场上麦冬类药材流通的主要品种。由于川麦冬和湖北麦冬的外观相似度较高，因此以湖北麦冬替代或掺杂麦冬的现象屡见不鲜。

许敏等，麦冬总皂苷含量测定方法的研究[J],临床医药实践，2010，19(5B)中用紫外-可见吸收分光光度法测定麦冬中总皂苷的含量，该方法专属性不强，虽然湖北麦冬价格远低于麦冬，但其皂苷的含量明显高于麦冬，总皂苷的含量方法不能有效地评价麦冬药材及其饮片的质量优劣，这也给如何科学有效鉴别湖北麦冬混用麦冬提出了新的挑战。目前，对包括湖北麦冬在内的山麦冬的分子鉴别研究多为DNA条形码比对分析和系统发育树的亲缘关系研究，未达到准确、易客观判定的鉴别方法要求。

专利CN104073553A公开了一种湖北麦冬的特异性引物，建立了湖北麦冬的普通PCR鉴别方法，并对湖北麦冬及其混伪品进行鉴别，由于该方法中未设计内参照反应，在不能有效地保证样品DNA提取成功的情况下，造成鉴别结果可能会出现假阴性的问题。当湖北麦冬样品基因组DNA未提取成功时，PCR反应自然不会出现DNA条带，此时该方法的鉴别结果为阴性，即样品不是湖北麦冬，造成鉴别结果的假阴性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于鉴别湖北麦冬的引物对，它是SEQ ID NO.1、SEQID NO.2所示的引物对。

本发明还提供了SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对在制备鉴别湖北麦冬的试剂中的用途。

进一步地，所述试剂是PCR-RFLP检测试验用试剂。

本发明还提供了一种用于鉴别湖北麦冬的试剂盒，它是PCR-RFLP检测试验用试剂，包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对。

进一步地，它还包括Taq DNA聚合酶、Mg²⁺buffer和dNTP。

更进一步地，它还包括特异性内切酶。

更进一步地，所述特异性内切酶为Nae I限制性内切酶。

本发明还提供了一种前述试剂盒在用于鉴别湖北麦冬中的用途。

本发明最后提供了一种鉴别湖北麦冬的方法，它包括如下步骤：

(1)提取样本DNA：取待检样品，提取其中的DNA；

(2)基因扩增：用权利要求5～7任意一项所述的试剂盒对待检样本中的DNA进行扩增，并对扩增产物酶切；

(3)结果检测：检测步骤2)所得扩增产物以及酶切产物的片段大小。

进一步地，所述待检样品为麦冬或湖北麦冬；所述检测的扩增产物在300-400bp之间有1条DNA条带，且酶切产物在100bp-300b之间有2条DNA条带片段，待检样品为湖北麦冬。