[发明专利]一种红托竹荪液体母种的制备方法

权利要求书

1.一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)培养基的前期准备：包括菌种活化与纯化，试管斜面培养基制备，试管平板培养基制备，液体培养基制作，接种摇床培养；

2)菌种活化：将红托竹荪母种从冰箱取出，室温内避光放置2天，利用镊子，夹取母种木屑菌块，直径0.5~0.8cm，置于平板培养基中央，25℃下避光培养15天；

3)斜面菌种制备：利用接种针，挑取活化后的平板菌种块接种于斜面培养基，放置在恒温气候箱，避光条件下25℃培养25~30天，培养至菌丝长满斜面，制成斜面菌种备用；

4)液体培养基制备，根据培养基配方精确称量并配置分装至锥形瓶，在121 ℃和0.15Mpa的条件下持续灭菌30min，待培养基冷却至室温；

5)：取一只长满的斜面菌种，在无菌条件下接种，使气生菌丝一面向上悬浮，在28℃条件下，黑暗静置48 h，然后放入往复式恒温振荡器中，在25℃、150r/min条件下进行摇床培养15天，即可得到红托竹荪液体菌种的母种。

2.根据权利要求1所述的一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中试管斜面培养基制备：称取新鲜马铃薯200g切成薄片，加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤，得滤液A，称取新鲜无霉变的麦麸200g，米糠50g，玉米粉50g，黄豆粉50g，混合均匀，使用纱布包扎好，然后加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤得滤液B，将滤液A和B混合均匀，加入葡萄糖20g、KH₂PO₄2g、MgSO₄1g、琼脂20g，补足水至1000mL，pH自然；配备完成后加热搅拌使琼脂溶解，并趁热将培养基分装至试管中，约占试管的1/4，每支约20mL，塞好棉花塞或橡胶塞，成单数捆扎一起，棉花塞端包扎油皮纸或塑料薄膜，在121℃和0.15Mpa的条件下灭菌30min，待试管冷却至50℃左右，将成捆斜放在斜面板上，斜面长度不超过试管长度的3/4，冷却后即为斜面培养基。

3.根据权利要求1所述的一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中试管平板培养基制备；称取新鲜马铃薯200g切成薄片，加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤，得滤液A，称取新鲜无霉变的麦麸200g，米糠50g，玉米粉50g，黄豆粉50g，混合均匀，使用纱布包扎好，然后加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤得滤液B，将滤液A和B混合均匀，加入葡萄糖20g、KH₂PO₄2g、MgSO₄1g、琼脂20g，补足水至1000mL，pH自然；配备完成后分装至1000mL三角瓶中，每瓶500mL，121℃和0.15Mpa灭菌30min，待培养基冷却至50~60℃时，在无菌环境下倒平板，每个平板30~35mL。

4.根据权利要求1所述的一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中液体培养基制作：精确称取葡萄糖50g，蛋白胨2g，KH₂PO₄3g，MgSO₄1.5g，(NH₄)₂SO₄ 1g，维生素B₁ 20mg，加水配置成1000mL，pH自然，将配置好的液体培养基按每瓶300mL装入500mL的锥形瓶中，盖上棉花塞，绑上牛皮纸，在123℃的条件下灭菌30min，待冷却至室温后，即可接种。

5.根据权利要求1所述的一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中接种摇床培养：在无菌环境下，取一只斜面菌种，将液体培养基倒入试管中，总体不超过试管的3/4，使用接种钩和接种铲将斜面菌种捣碎成0.1~0.2 cm²菌块，制成菌块悬液，然后全部接入锥形瓶中，塞好棉花塞，包上牛皮纸或报纸，接种完成。

6.根据权利要求2或3所述的一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于：所述平板为玻璃平板，直径90mm，试管为玻璃试管，玻璃试管大小为25mm×200mm，棉花塞为非脱脂棉。