[发明专利]一种免标记核酸适配体传感器及其检测乳铁蛋白方法

说明书

本发明提供了免标记核酸适配体传感器及其检测乳铁蛋白方法，属于分析检测技术领域。所述免标记核酸适配体传感器由乳铁蛋白和核酸适配体组成，所述核酸适配体能够与乳铁蛋白特异性结合，所述核酸适配体的核苷酸序列为5’‑TGGTGCTGCCCCTAGTCTCCGGCTGATAGCTGCTTCTTGG‑3’。所述核酸适配体无需标记，成本低。本发明的基于免标记核酸适配体传感器检测乳铁蛋白的方法，由于DNA结构选择性嵌入染料可以与本发明的核酸适配体的小沟区域结合产生强烈荧光的特性，具有操作简单、成本低、灵敏度高、特异性强等优势，避免了现有检测方法需要昂贵仪器、专业操作人员等缺陷。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，尤其涉及一种免标记核酸适配体传感器及其检测乳铁蛋白方法。

背景技术

核酸适配体作为一种理想的新兴生物传感器识别元件，是通过指数富集方法从随机寡核苷酸文库中筛选得到的一段能与靶分子特异性结合的DNA或RNA序列，具有体积小、易选择、稳定性好、易修饰、靶标范围广等优点，已经广泛应用于临床诊断、食品安全、生物治疗等多个技术领域。与其他基于抗体或酶的生物传感器相比，核酸适配体生物传感器具有设计灵活、快速简便、经济高效、准确灵敏等优势。传统的生物传感器主要由生物识别和信号转换两部分构成，目前适配体传感器的信号转换技术主要有比色、荧光、电化学、化学发光等。其中，基于适配体的荧光传感器是光学生物传感器中最为常见的一种，因易于操作、高效灵敏、普遍适用、成本低等特点被广泛研究和应用。现有的荧光方法大多使用荧光基团标记适配体或改性碱基等，这些方法既耗时又昂贵，而且适配体标记后其亲和性和选择性以及检测灵敏度会受到影响。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种免标记核酸适配体传感器及其检测乳铁蛋白方法，本发明的核酸适配体无需标记，该检测乳铁蛋白方法操作简单，且能够快速准确、特异性地检测乳铁蛋白。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种免标记核酸适配体传感器，由乳铁蛋白和核酸适配体组成，所述核酸适配体能够与乳铁蛋白特异性结合，所述核酸适配体的核苷酸序列为5’-TGGTGCTGCCCCTAGTCTCCGGCTGATAGCTGCTTCTTGG-3’。

本发明还提供了一种上述免标记核酸适配体传感器的制备方法，将所述乳铁蛋白和所述核酸适配体孵育，制得免标记核酸适配体传感器。

优选的，所述孵育的温度为22～28℃，孵育的时间为15～30min。

本发明还提供了一种基于上述免标记核酸适配体传感器或上述制备方法得到的免标记核酸适配体传感器检测乳铁蛋白的方法，包括如下步骤：

(1)加入多个不同已知浓度的乳铁蛋白标准溶液，再分别加入核酸适配体溶液，混匀孵育，然后加入DNA结构选择性嵌入染料进行反应，检测各自的荧光强度，绘制标准曲线；

(2)加入未知浓度的含乳铁蛋白待测样本溶液，再分别加入核酸适配体溶液，混匀孵育，然后加入DNA结构选择性嵌入染料进行反应，检测荧光强度，根据标准曲线得到待测溶液中乳铁蛋白的浓度。

优选的，所述DNA结构选择性嵌入染料包括SYBR Green I或Pico Green。

优选的，步骤(1)和步骤(2)中所述反应的时间为0～10min，所述反应温度为22～28℃。

优选的，所述乳铁蛋白标准溶液浓度范围为0～3μmol/L；所述核酸适配体溶液的浓度为100nmol/L。

优选的，所述DNA结构选择性嵌入染料的浓度为1～20×。

优选的，步骤(1)和步骤(2)中所述孵育的温度为22～28℃，孵育的时间为15～30min。

优选的，所述荧光检测条件为：激发波长485nm，发射波长528nm。