[发明专利]一种免标记核酸适配体传感器及其检测乳铁蛋白方法在审
| 申请号： | 202211044119.X | 申请日： | 2022-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN116042628A | 公开（公告）日： | 2023-05-02 |
| 发明（设计）人： | 朱超;颜朦朦;刘佳惠;陈子雷 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/115 | 分类号： | C12N15/115;G01N33/53;G01N33/58;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 吴波 |
| 地址： | 250100 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 标记 核酸 适配体 传感器 及其 检测 铁蛋白 方法 | ||
1.一种免标记核酸适配体传感器，其特征在于，由乳铁蛋白和核酸适配体组成，所述核酸适配体能够与乳铁蛋白特异性结合，所述核酸适配体的核苷酸序列为5’-TGGTGCTGCCCCTAGTCTCCGGCTGATAGCTGCTTCTT GG-3’。
2.根据权利要求1所述免标记核酸适配体传感器的制备方法，其特征在于，将所述乳铁蛋白和所述核酸适配体孵育，制得免标记核酸适配体传感器。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述孵育的温度为22～28℃，孵育的时间为15～30min。
4.一种基于权利要求1所述免标记核酸适配体传感器或权利要求2或3所述制备方法得到的免标记核酸适配体传感器检测乳铁蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)加入多个不同已知浓度的乳铁蛋白标准溶液，再分别加入核酸适配体溶液，混匀孵育，然后加入DNA结构选择性嵌入染料进行反应，检测各自的荧光强度，绘制标准曲线；
(2)加入未知浓度的含乳铁蛋白待测样本溶液，再分别加入核酸适配体溶液，混匀孵育，然后加入DNA结构选择性嵌入染料进行反应，检测荧光强度，根据标准曲线得到待测溶液中乳铁蛋白的浓度。
5.根据权利要求4所述检测乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述DNA结构选择性嵌入染料包括SYBR GreenI或Pico Green。
6.根据权利要求4所述检测乳铁蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中所述反应的时间为0～10min，所述反应温度为22～28℃。
7.根据权利要求4所述检测乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述乳铁蛋白标准溶液浓度范围为0～3μmol/L；所述核酸适配体溶液的浓度为100nmol/L。
8.根据权利要求4所述检测乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述DNA结构选择性嵌入染料的浓度为1～20×。
9.根据权利要求4所述检测乳铁蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中所述孵育的温度为22～28℃，孵育的时间为15～30min。
10.根据权利要求4所述检测乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述荧光检测条件为：激发波长485nm，发射波长528nm。
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