[发明专利]一种用于检测水生动物寄生虫的基因芯片、试剂盒及应用

说明书

本发明提供一种用于检测水生动物寄生虫的基因芯片，其包括若干检测区和将相邻的两个检测区隔开的若干间隔区；每一检测区包括加样孔、若干片基，以及将每一个片基连通至加样孔的若干微槽，每一片基上分别固定有特异性针对一种水生动物寄生虫的特征性靶基因的引物组。本发明能够对多种水产品寄生虫同步进行检测，且能够保障准确度和精确性，提升了检测效率，节省了检测时间和成本。

技术领域

本发明分子生物学及生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测水生动物寄生虫的基因芯片。

背景技术

基因芯片是生物芯片的一种，自20世纪80年代出现后在生命科学领域应用广泛。其原理为大量合成的DNA探针有序地固定在芯片载体表面成为基因芯片，待检样品经过扩增和标记后，与基因芯片杂交反应，扫描并分析杂交反应的信号，即可得到待检样品的基因信息，相比于传统的PCR、血清学检测技术具有高灵敏度、高通量的特点。此外，基因芯片技术减少了传统检测技术中为同时检测多种病原而增加多种引物带来的非特异性反应的发生概率，对于多种病原混合感染的诊断显示出较大的优势，可为重大动物疫病早期监控提供重要的技术保障。微流控芯片技术(microfluidic chip assay)是一种基于环等温扩增技术(loop mediated isothermal amplification，LAMP)的高通量快速核酸检测技术。它将不同病原特异性引物固化在同一块塑料芯片不同的微孔反应槽内；这些微孔反应槽与加样孔相连，通过离心把待检核酸样本均匀地甩入各微孔反应槽内；每块塑料芯片有8个加样孔，每个加样孔与4个微孔反应槽相连，故理论上在1块芯片的8个加样孔加入同一份待检核酸，可以实现32种不同病原的同步检测。

目前在动物疫病检测中应用广泛，但在水产动物中多种疫病同步检测及寄生虫检测中报道较少。目前寄生虫分子生物学检测主要是采用单重PCR方法，检测时间较长，对人力物力都是较大的浪费，针对目前基因芯片在寄生虫领域的应用较少。

发明内容

本发明针对上述现有方法中只能针对特定标的重复操作进行检测，导致检测时间长的缺陷，提供了一种能够同步检测多种水生动物寄生虫的基因芯片，并将其应用到水生动物病原体的检测中。

本发明首先提供了一种用于检测水生动物寄生虫的基因芯片，其包括若干检测区和将相邻的两个检测区隔开的若干间隔区；每一检测区包括加样孔、若干片基，以及将每一个片基连通至加样孔的若干微槽，每一片基上分别固定有特异性针对一种水生动物寄生虫的特征性靶基因的引物组；

所述水生动物寄生虫的特征性靶基因选自：虾肝肠胞虫的spore wall protein 1(SWP1)mRNA、牡蛎包拉米虫的small subunit ribosomal RNA(SSU rRNA)、海水派琴虫的small subunit ribosomal RNA(SSU rRNA)、奥尔森派琴虫的internal transcribedspacer 1(ITS1)、大西洋鲑鱼三代虫的cytochrome oxidase subunit I(Cox1)、折光马尔太虫的small subunit ribosomal RNA(SSU rRNA)和鱼华支睾吸囊蚴cytochrome oxidasesubunit I(Cox1)中的至少两种或全部所述水生动物寄生虫选自虾肝肠胞虫、牡蛎包拉米虫、海水派琴虫、奥尔森派琴虫、大西洋鲑鱼三代虫、折光马尔太虫和鱼华支睾吸虫囊蚴中的两种或多种；

所述水生动物寄生虫的特征性靶基因选自：虾肝肠胞虫spore wall protein 1(SWP1)mRNA、牡蛎包拉米虫small subunit ribosomal RNA(SSU rRNA)、海水派琴虫smallsubunit ribosomal RNA(SSU rRNA)、奥尔森派琴虫internal transcribed spacer 1(ITS1)、大西洋鲑鱼三代虫cytochrome oxidase subunit I(Cox1)、折光马尔太虫smallsubunit ribosomal RNA(SSU rRNA)和鱼华支睾吸虫囊蚴cytochrome oxidase subunit I(Cox1)。