[发明专利]一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒

说明书

本发明公开了一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒，包括以下组分：裂解液、磁珠、RNase A溶液、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液。所述裂解液包含CHAPS、盐酸胍、尿素、非离子表面活性剂、缓冲液、聚己缩胍，三异丁基铝；本发明通过试剂配方的优化，提高了真菌基因组DNA的提取效率。本发明将裂解液与前处理溶液A溶液加在同一孔位中，CHAPS、盐酸胍、尿素等、聚己缩胍，三异丁基铝在裂解真菌外壳结构的同时，结合异丙醇等沉淀基因组DNA，使基因组DNA快速的吸附在磁珠上，极大地提高了提取效率。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒。

背景技术

在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量、纯度及完整性直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠(以下简称磁珠)为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。

目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法等，但上述方法存在提取试剂有毒，操作繁琐，易导致污染等问题，而磁珠法不使用有毒试剂，操作简单，不易污染，已经成为目前分子生物学和临床检验医学研究的理想方法。

磁珠法对于真菌基因组DNA提取同样有效，但由于真菌细胞壁成分复杂，提取过程中难以使真菌得到充分裂解，真菌中富含的多糖、色素、核酸酶等物质使得核酸的分离更加困难。已报道的真菌破壁方法有：液氮冻融、-70℃冻融、酶消解、超声破碎、高盐溶液、尿素缓冲液处理等等，但是上述方法均有其缺陷，例如冻融处理不适合配合核酸提取仪使用；酶消解前处理复杂；超声破碎存在标本间污染的可能；高盐溶液、尿素缓冲液处理的检测限较高，检测结果不理想；

此外，传统的CTAB法是提取的真菌基因组DNA较常见的方法，其主要原理为CTAB是一种阳离子去污剂，可与蛋白质形成络合物，沉淀蛋白质物质，达到分离纯化核酸的目的，再经过酚、氯仿等物质的纯化离心、洗涤、洗脱等步骤后实现对DNA的提取工作。但是针对多糖含量较高的产菌核真菌的DNA提取无法达到理想的效果。

因此寻找一种有效裂解真菌、高效提取真菌基因组DNA的磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒是目前丞待解决的问题。

发明内容

具体的，本发明的技术方案如下：

一种磁珠法真菌基因组DNA提取裂解液，其成分和含量如下：

进一步的，本发明提供一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒，包括上述的裂解液，还包括磁珠、RNase A溶液、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液，其中：

所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；

所述清洗液I的成分和含量如下：

所述清洗液II为75％乙醇；

所述洗脱液的成分和含量如下：

缓冲液 0.04～0.05mol/L

EDTA 0.004～0.04mol/L；

所述前处理溶液A成分和含量如下：

SDS 10％-20％

非离子表面活性剂 2％-6％